哮喘小鼠肺T细胞中LAT的表达及其功能的研究

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1、上海交通大学硕士学位论文哮喘小鼠肺T细胞中LAT的表达及其功能的研究姓名：任涟萍申请学位级别：硕士专业：内科学（呼吸系病）指导教师：郭雪君20070501上海交通大学医学院硕士学位论文上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密□。（请在以上方框内打“

2、√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日3上海交通大学医学院硕士学位论文哮喘小鼠肺T细胞中LAT的表达及其功能的研究摘要背景：哮喘是由多种细胞和细胞成分参与的气道慢性炎症性疾病，也是一种具有多基因遗传倾向的疾病。在哮喘的发病过程中，T细胞对致敏原的识别以及T细胞的活化是关键性始动环节。研究证实，哮喘患者体内存在Thl／Th2亚群的功能失衡：Th1型细胞免疫应答反应较正常人低，而Th2型的免疫应答水平则显著上调。LAT基因在介导T细胞成熟分化的跨膜信号转导中起了重要的作用。目的：明确LAT基因在哮喘小鼠肺组织T细胞中的表达是否存在异常；构

3、建能用于LAT基因功能研究的真核表达载体；观察气道内LAT基因转染对哮喘小鼠气道炎症的影响。方法：免疫磁珠负选法分离纯化小鼠肺脏T细胞,纯度经流式细胞仪验证。采用半定量PCR及WesternBlot方法检测哮喘小鼠与正常小鼠肺组织T细胞中LAT的表达是否存在差异；利用基因克隆技术构建真核表达载体pCMV-HA-LAT，转染小鼠淋巴细胞，运用WesternBlot方法检测外源LAT蛋白的表达；经鼻滴入pCMV-HA-LAT质粒与脂质体的混合物后观察小鼠BALF中细胞成分、BALF及血清中IL-4及IFN-γ，肺组织病理改变。4上海交通大学医学院硕士学位论文结果

4、：提取的小鼠肺组织T细胞纯度>95％；哮喘小鼠肺组织T细胞的LAT基因在mRNA转录水平及蛋白水平的表达均显著低于正常小鼠（P<0.05）。构建的真核表达载体pCMV-HA-LAT成功转染小鼠淋巴细胞，并运用WesternBlot方法检测到外源LAT蛋白的表达；转入了LAT基因后，哮喘小鼠BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞百分比、淋巴细胞百分比均显著下降，BALF及血清中的IL-4下降，而IFN-γ增加明显。肺组织病理显示支气管黏膜下及肺组织周围的炎症细胞浸润减轻、气道上皮损伤减轻。结论：哮喘T细胞中LAT表达水平下调可能是导致其出现Th1/Th2失衡的原因之一

5、；经鼻滴入转染LAT基因能上调Th1，下调Th2，减轻哮喘小鼠气道炎症反应。关键词：哮喘，T细胞活化衔接子，真核表达载体，转染5上海交通大学医学院硕士学位论文LATEXPRESSIONINLUNGTCELLSOFTHEASTHMATICMOUSEANDITSINFLUENCEONTHEPATHOPHYSIOLOGYOFASTHMAABSTRACTBackground:Asthmaisacommondisordercharacterizedbychronicairwayinflammationandalsounderlyinggenedefects.Theac

6、tivationanddifferentiationofTcellsplaysacentralroleindrivingtheairwayinflammationassociatiedwithasthma.Inparticular,helpTtype2(Th2)cellsarebelievedtobeextremelyimportantininitiatingandorchestratingtheasthmaticairwayinflammatoryresponse.ThelinkerforactivationofTcells(LAT)playsanimpo

7、rtantroleinsignaltransductionforTcellactivationanddifferentiation.Purpose:ToexaminetheexpressionofLATgeneandproteininlungTcellsofasthmaticmouse,toresearchthebiologicalfunctionofLATgenetoasthmaticairwayinflammationbytransferringLATplasmidgenetoasthmaticmouseairway.Method:Tcellsinmou

8、selungtissuewereisolatedfr