视瞻昏渺发病机理与VEGF、bFGF、PEDF表达

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1、视瞻昏渺发病机理与VEGF、bFGF、PEDF表达【摘要】目的：观察脉络膜新生血管（CNV）动物模型视网膜色素上皮至脉络膜之间细胞因子VEGF、bFGF、PEDF表达的变化。方法：用半导体激光光凝建立CNV动物模型，于造模后1w，2w，3w，4w，8w分别行免疫荧光检查（FFA）；于造模后8w处死动物行HE染色观察视网膜和脉络膜的病理组织学变化，免疫组化法检测VEGF、bFGF、PEDF表达。结果：HE染色可见脉络膜新生血管形成。造模后模型组VEGF、bFGF上调，VEGF/PEDF值升高，与正常对照组比较，

2、差异有统计学意义（P<0.01）；PEDF值轻度上调，与正常对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：半导体激光可诱导CNV动物模型，该模型可做为视瞻昏渺的动物模型进行实验研究。【关键词】视瞻昏渺；脉络膜新生血管；新生血管内皮细胞生长因子；碱性成纤维细胞生长因子；色素上皮衍生因子年龄相关性黄斑变性（AMD）属于祖国医学“视瞻昏渺”范畴，本病随年龄增长，其发病率亦逐年升高。导致患者视力丧失的主要原因是继发于渗出型年龄相关性黄斑变性（ESMD）的脉络膜新生血管（CNV）。本病发病机理尚不明确,治疗十

3、分困难。研究显示，CNV的发生、发展和血管内皮细胞生长因子（vascularendothelialgrowthfactor，VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（basicfibroblastgrowthfactor，bFGF）、色素上皮衍生因子（pigmentepithelium-derived7factor，PEDF）等密切相关。因此,我们从基础实验研究着手，建立相关动物模型,对VEGF、bFGF、PEDF进行研究,以期探索本病的发病机理，为寻求有效的治疗方案奠定实验基础。1材料与方法1.1实验材料成年青紫

4、蓝兔12只（约6月~7月龄），普通级，体重（2500±20）g。1.2实验方法1.2.1造模方法12只青紫蓝兔随机分为正常对照组和模型组两组，每组6只。模型组以0.5%美多丽P滴眼液双眼散瞳，0.4%倍诺喜行眼表麻醉后,在全视网膜镜下用半导体激光（波长532nm）于视乳头下方作视网膜光凝。照射部位位于视乳头及髓线下方，以光凝后有气泡产生为击破Bruch膜的标志［1］。激光参数：功率625mW~750mW，时间0.1s，光斑直径50μm，点数40点。1.2.2观察指标与检查方法于造模后1w，2w，3w，4w，8

5、w行FFA检查。造模后87w处死动物，取动物眼球置于10%中性福尔马林液中，将固定好的眼球去除多余组织，留取激光斑部位眼球壁组织，正常对照组留取相应部位组织，常规石蜡包埋、切片，行HE染色。VEGF、bFGF、PEDF免疫组化染色用SP法，光学显微镜下观察视网膜和脉络膜组织学变化。造模8w后采用Mias-2000型图象分析系统测定VEGF、bFGF及PEDF阳性表达。1.3统计学方法采用SPSS12.0统计软件，组间比较采用t检验。2结果2.1HE、VEGF、bFGF与PEDF染色结果结果见图1。7由图1可以

6、看出，HE染色正常对照组可见视网膜、脉络膜的各层结构整齐，细胞结构正常。视网膜各层细胞着染正常，未见坏死、出血等结构改变。视网膜神经纤维层排列完整，细胞排列致密，内核层无碎裂及细胞核减少，椎杆体细胞排列整齐，色素上皮细胞排列紧密；脉络膜结构完整，各层细胞着染正常。模型组可见视网膜神经节细胞不同程度减少，内颗粒层和外颗粒层结构不清，激光斑处色素上皮层基本消失，视网膜、脉络膜黏附在一起，激光斑下可见成纤维细胞，其中可见CNV，其血管管径较小，血管壁内皮细胞核肿胀，较圆。正常对照组视网膜色素上皮至脉络膜之间VEGF

7、、bFGF、PEDF阳性表达较少，呈颗粒状；模型组阳性表达较多，呈密集的颗粒状及条带状，激光斑两侧视网膜脉络膜VEGF、bFGF、PEDF阳性表达较集中。视网膜色素上皮至脉络膜之间有棕黄色的颗粒，为bFGF阳性表达。正常对照组bFGF阳性表达较少，呈颗粒状；模型组阳性表达较多，呈密集的颗粒状及条带状，激光斑两侧视网膜脉络膜bFGF、bFGF、PEDF阳性表达较集中。2.2VEGF、bFGF及PEDF阳性表达与VEGF/PEDF结果比较结果见表1。由表1可见，造模后8w与正常对照组比较，模型组VEGF、bFGF

8、上调（P<0.01），PEDF值轻度上调，VEGF/PEDF值升高（P<0.01）。3讨论早在《诸病源候论》中已有“目暗不明候”和“目茫茫候”的记载。《证治准绳》在论述视瞻昏渺时曰：“若人年五十以外而昏者，虽治不复光明，其时犹月之过望，天真日衰，自然目光渐谢”；《证治准绳·七窍门》中亦有云：“谓目内外别无证候，但自视昏渺，蒙昧不清也。”目前本病尚无专门的动物模型，CNV是渗出型年龄相关性