脐血CD34细胞体外扩增时HOXB4基因表达的变化

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1、脐血CD34+细胞体外扩增时HOXB4基因表达的变化作者：唐宇宏，费小明，沈文怡，缪扣荣，崔毓桂，汪承亚【摘要】同源盒基因家族成员HOXB4反映原始造血干/祖细胞(PHSC/PHPC)的自我更新和增殖能力。本研究采用实时定量RT-PCR的方法在mRNA水平上检测HOXB4基因的表达，以观察体外扩增脐血CD34+细胞自我更新的水平。结果显示：随着体外培养时间的延长，虽然CD34+细胞数增加，但HOXB4表达下降；周后，HOXB4几乎检测不到，与成熟外周血淋巴细胞表达HOXB4的水平相同；CD34+细胞与骨髓间充质干细胞(BM-MSC)共培养可以减缓CD34+细胞HOXB4表达的下

2、降。结论：脐血CD34+细胞体外扩增过程中自我更新能力逐渐下降。CD34+与BM-MSC共培养有助于减缓体外扩增的CD34+细胞自我更新能力的丧失。【关键词】脐血CD34+细胞　　ExpressionofHOXB4inCordBloodProgenitorCellsExpandedinvitro14　　AbstractHOXB4，amemberofhomeoboxgenefamily，iscloselyrelatedtotheself-renewingandproliferativeabilityofprimitivehematopoieticstem/progenitorce

3、lls(PHSC/PHPC).Thisstudywasaimedtoinvestigatetheself-renewinglevelofcordbloodprogenitorcells(CBPC)expandedinvitro.TheHOXB4expressionatmRNAlevelwasassayedbyusingrealtimeRT-PCR.Theresultsindicatedthatascultureprolonged，thetotalcells，CD34+cellsgreatlyincreased，howevertheHOXB4expressiongradually

4、declined，evendowntoundetectablelevelsimilartothatofmaturelymphocytes.Meanwhile，itwasshownthatCD34+cellsco-culturedwithbonemarrowmesenchymalstemcells(BM-MSC)couldabatethedeclineofHOXB4expression.Itisconcludedthattheself-renewingpotentialofCD34+cellsgraduallydecreasedduringexpansioninvitro，co-

5、culturewithBM-MSCwashelpfultoCD34+cellexpansionandslowedthelosstrendofitsself-renewal.　　KeywordsHOXB4；cordbloodCD34+cells；exvivoexpansion；bonemarrowmesenchymalstemcell；realtimeRT-PCR14脐血是造血干细胞(HSC)的重要来源，但脐血量有限，单份脐血HSC往往不能满足成年患者移植的需要。因此，许多人致力于体外扩增脐血造血干/祖细胞(CBSC/CBPC)的研究。既往研究表明，FL、TPO、SCF等可以促使

6、原始造血祖细胞增殖，经2周的培养，CD34+细胞数量增加近百倍［1-3］。我们先前采用骨髓间充质干细胞(BM-MSC)共培养，CD34+细胞比值增加更为明显［4］，但对于体外扩增的CD34+细胞自我更新能力的水平并不清楚。最近发现同源盒基因家族成员HOXB4作为一类转录因子，可正性调节HSC的自我更新［5-7］。HOXB4在原始造血干细胞（PHSC）上高表达，随着PHSC向各系分化，表达水平逐渐降低，直至消失［8］。因此认为：HOXB4表达强弱能够作为一种衡量CD34+细胞自我更新能力的标志。本研究以实时定量RT-PCR的方法检测HOXB4的表达，探讨造血因子刺激的单纯培养及以

7、BM-MSC为基质的体外扩增CD34+细胞能否维持其自我更新的能力。　　材料和方法　　主要仪器和试剂　　TripureReagent(Roche，Germay)，AWV逆转录酶（Promega，USA），TAQMAN荧光引物探针（Appliedbiosystems，USA），TAQMANPCRuniversalMasterMix（Appliedbiosystems，USA），ABIPrism7000实时定量扩增仪（Applied14biosystems，USA），流式细胞仪(EPIC-XLB