医学毕业论文体外诱导人脐血cd34细胞向肝细胞的分化

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1、体外诱导人脐血CD34+细胞向肝细胞的分化姓名：2014年6月25日体外诱导人脐血CD34+细胞向肝细胞的分化作者：张芳婷，叶静，万汇涓，龙霞，聂李平，于洁，房家智【关键词】肝细胞摘要：0的探讨在体外培养条件下人脐血CD34+细胞向肝细胞的分化。方法用磁性细胞分选试剂盒(MACS)分离出CD34+细胞后在含50mL/LFBS,lxITS,4.7mg/L亚油酸，10-4mol/L2磷酸抗坏血酸的低糖型DMEM巾培养，并以FGF4(100^ig/L),HGF(20gg/L)进行诱导。分别于生长因子刺激前和刺激8、16

2、d时留取细胞。通过RTPCR对ALB、AFP、GATA4等mRNA的表达水平进行检测;用免疫细胞化学染色检测ALB蛋白的表达,并收集培养液测定ALB的质量浓度。结果流式细胞仪检测结果显示CD34+细胞的平均分离纯度90%,达到分离要求。RTPCR检测到诱导后的CD34+细胞表达ALB、AFP、GATA4mRNA。免疫细胞化学染色可见诱导16d的CD34+细胞出现ALB阳性表达细胞，ELISA检测表明诱导组8、16d培养液屮的ALB质量浓度明显增高，与诱导前和未诱导组相比均有显著差异(P0.01)。结论在体外培养条

3、件下，脐血CD34+造血干细胞可分化为表达白蛋白的类肝细胞。关键词：脐血CD34+细胞；肝细胞；分化ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatethedifferentiationofCD34+cellsderivedfromhumanumbilicalcordbloodintohepatocytecellsinaninvitrosystemsupplementedwithgrowthfactors(GF).MethodsCD34+cellswereisolatedbymagneticcells

4、orting(MACS).ThepurityofacquiredcellswasdeterminedbyFACSanalysis.PurifiedCD34+cellswereculturedinDMEMsupplementedwith50mL/LFBS，1XITS，10-4mol/Lascorbicacid2phosphate，4.7mg/Llinoleicacid，andacombinationofFGF4(100

5、^g/L)andHGF(20

6、ig/L).Culturedcellswerecollecteda

7、fter8dand16dtodeterminetheextentofthecellconversionbymicroscopicobservationonthemorphology，RTPCRonthetranscriptionofALB，AFPandGATA4mRNA,immunocytochemistryontheexpressionofALBandELISAonthequantificationoftheALBproductinthemedium.ResultsCD34+cellsaccountedform

8、orethan90%afterMACS.ALB，AFPandGATA4mRNAandalbuminproteinpositivecellswerefoundinculturedcellsafter16d.TheALBproductinculturemediumwassignificantlyincreasedafterculturingwithGFincomparisonwithcontrolgroups(P0.01).ConclusionAconversionofCD34+cellsderivedfromhum

9、anumbilicalcordbloodintohepatocyelikecellshadbeenobservedinthisexperimentalculturesystem.KEYWORDS:cordbloodCD34+cell;hepatocytes;differentiation骨髓、脐血屮的干细胞能够分化为类肝细胞己经被众多实验研究所证实。随着研究的增多，人们已不满足于全骨髓或全脐血细胞的研究，而侧重于将这种能分化的细胞定位于某一亚群或某一类干细胞，旨在从根木上探讨这一分化的机制。H前已证实基质干细胞的

10、众多亚群可分化为肝细胞，而造血干细胞的此类研宂则相对较少。CD34+抗原是一种分子质量为110-120ku的高度糖基化的I型膜蛋白，主要存在于幼稚的造血干细胞和造血祖细胞质膜上以及少量内皮细胞表面。本实验拟采用体外培养的方法，探讨脐血CD34+造血干细胞转化为肝细胞的可能性。1材料与方法1.1材料抗人CD34免疫磁珠（德国Miltenyi公司）、CD34PE（美国库尔特公