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《人骨形态发生蛋白腺病毒表达载体转染人骨髓基质》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、·60·中国矫形外科杂志 2004年1月第12卷第1、2期 OrthopJChin,Vol112,No11、2January2004·实验研究·人骨形态发生蛋白2腺病毒表达载体转染人骨髓基质△干细胞和对其增殖及分化的影响333李建军 崔亚楠 韩 东 王 宏 刘建国 徐莘香摘 要 目的:研究人骨形态发生蛋白22腺病毒表达载体(Ad2BMP22)转染人骨髓基质干细胞(hBMSC)对其增殖及分化的影响。方法:利用免疫组化、原位杂交染色和蛋白印迹法检测转染后细胞BMP22的表达。流式细胞仪和ALP活性测定分析BMP
2、22基因转染对细胞增殖、分化的影响。结果:转染后,hBMP22基因在mRNA水平和蛋白水平均有表达。蛋白印迹法检测到培养液中有BMP22蛋白阳性表达,S期细胞比例和ALP活性明显增高。结论:Ad2BMP22可高效转染hBMSC,且促进细胞增殖和成骨转化。关键词 腺病毒; 骨形态发生蛋白2; 骨髓基质干细胞; 基因转染中图分类号R687文献标识码A文章编号 1005-8478(2004)1、2-0060-03EffectsofAdenovirus2hBMP22TransfectiononProliferati
3、onandDifferentiationofHumanBoneMarrowStromalCellsinVitro∥LIJian2jun,CUIYa2nan,HANDong,etal1DepartmentofOrthopaedics,theFirstHospitalofJilinUniver2sity,Changchun130021AbstractObjective:TostudytheeffectsofAdenovirus2hBMP22transfectiononproliferationanddiffer
4、entiationofhu2manbonemarrowstromalcells(hBMSCs)invitro1Methods:TheexpressionofhBMP22inthesecellsafterinfectionwasde2terminedbyinsituhybridizationandimmunohistochemicalstainingandWesternblotanalysis1Thechangesofproliferationanddifferentiationinthecellswereo
5、bservedbyflowcytometryandALPactivityanalysis1Results:TheexpressionofhBMP22wasconfirmedinlevelsofmRNAandprotein1ThepresenceofBMP22wasdetectedinthesupernatantofinfectedcells1Cellularpro2portioninSperiodandALPactivityobviouslyincreasedafterinfection1Conclusio
6、n:Ad2BMP22caninfecthBMSCwithhighef2ficiencyandpromotecellsproliferationandosteoblastconversion1KeywordsAdenoviralvector;Bonemorphogeneticprotein;Bonemarrowstromalcells;Genetransfection 骨形态发生蛋白(BMP22)在骨修复过程中促进细胞增111 人骨形态发生蛋白22腺病毒表达载体(Ad2BMP22)由殖、分化和基质分泌,在体
7、内、体外均可诱导骨形成,对骨美国哈佛医学院分子骨科中心Oliver博士馈赠。携带β2半乳折和骨缺损的治疗可发挥重要作用。本研究采用腺病毒表达糖酐酶基因的腺病毒对照载体(Ad2Lacz)和人胚肾细胞株载体将人骨形态发生蛋白22(hBMP22)基因导入人骨髓基质(293细胞)由吉林大学白求恩基础医学院病理教研室高航博干细胞(hBMSC),分析hBMP22基因转染对hBMSC增殖、士馈赠。分化的影响,为进一步构建BMP22基因治疗的组织工程骨奠112 方法定实验基础。11211Ad2BMP22重组腺病毒表达载体扩
8、增、纯化1 材料与方法将Ad2BMP22感染293细胞,待细胞完全出现病变后,收集溶菌产物和细胞,反复冻融3次,离心取上清收获病毒。△ 国家自然科学基金课题(基金号:39800151) 吉林省科技厅基氯化铯密度梯度离心法纯化,病毒噬菌斑形成测定病毒滴度。金资助(编号:20010110)-70℃保存备用。作者单位:吉林大学第一医院骨科,长春 13002111212hBMSC分离培养3吉林大学中日联谊医院中心研究室征
