蚕豆皮中原花青素提取的工艺研究

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1、蚕豆皮中原花青素提取的工艺研究【摘要】为优选蚕豆皮中原花青素的微波辅助提取工艺，采用L9(34)正交设计并结合单因素轮换法，对蚕豆皮中原花青素的提取条件进行优化。结果，蚕豆皮中原花青素最佳提取条件为：提取剂浓度50%、微波功率400W、提取时间10min、料液比为1∶15，3次提取基本可将其完全提出，测得原花青素含量为2.32%。认为优选出的工艺稳定、合理、可行。【关键词】蚕豆皮;微波提取;原花青素蚕豆皮(ViciafabaLinn.)为豆科植物蚕豆的种皮，具有利尿渗湿的功效。据文献报道，蚕豆皮中含有原花青素[1]。原花青素(Proanthocyanidin

2、s)，是自然界中广泛存在的聚多酚类混合物，具有多种生物活性，是近年来不断开发研究的一种极强体内活性功能因子。国内生产的原花青素主要是从葡萄皮中提取，它也存在于松树皮、蚕豆皮和桑叶等中，含量在2%～10%，其分子量在500～20000Da之间[2]。11　　微波提取是指在天然植物有效成分的提取过程中进入微波场，利用微波场的特性和优点来强化有效成分浸出的新型提取方法[3]。与传统溶剂提取法相比，微波提取技术具有作用时间短、速度快、提取效率高、节能等显著特点。本文运用正交试验研究蚕豆皮中原花青素微波提取工艺的影响因素，确定最佳提取方案，为提高蚕豆皮的附加值，进一步

3、研究开发提供依据，也为原花青素的进一步研究和应用提供原料。　　1仪器和试药、试剂　　1.1仪器TU-1901双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司生产);微波提取设备(由格兰仕微波炉改选而成);电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司生产);FW100型高速万能粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司生产);SHZ-D循环水式真空泵(巩义市英峪予华仪器厂生产);RE—52A旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂生产);　　1.2试药、试剂蚕豆皮(粉碎至粒度为40目，放入广口瓶备用);儿茶素对照品(中国药品生物制品检定所，批号110878-200102)。甲醇、乙醇

4、、丙酮、硫酸、香草醛，均为分析纯。　　2实验方法　　2.1蚕豆皮中原花青素的提取方法　　准确称取粉碎后的蚕豆皮5.0g于15011mL圆底烧瓶中，在一定料液比、溶剂浓度、微波功率条件下提取一定时间，取出过滤，将滤液减压浓缩，测定原花青素的含量。本文中以百分含量表示，即每100g蚕豆皮经提取得到的原花青素的量。　　2.2原花青素含量的测定　　原花青素由不同数量的儿茶素或表儿茶素结合而成，最简单的原花青素是儿茶素与表儿茶素形成的二聚体，此外还有三聚体、四聚体、直至十聚体等等。国际通用的原花青素的分析方法是分光光度法，本文选用香草醛检测法。　　原花青素的显色机理与

5、儿茶素相似，在酸性条件下，原花青素组成单元儿茶素的A环化学活性较高，其上的羟基可以和香草醛发生缩合反应，在浓酸作用下形成的产物变为有色的正离子，由于香草醛和多酚类物质的一对一的特异结合，根据此正碳离子吸光度可测定出原花青素含量。此法具有操作简单、重现性好、线性范围宽的优点，目前普遍用于测定原花青素的含量[4]。　　2.2.1标准曲线的绘制　　1)溶液配制　　儿茶素标准液：准确称取儿茶素标准品(65℃11真空干燥至恒重)，用50%甲醇制成浓度分别为0.04、0.08、0.12、0.16、0.20mg/mL的溶液作为标准溶液;30g/L香草醛溶液：30g香草醛溶

6、于1000mL甲醇中;30%硫酸溶液：30mL硫酸(95%～98%)+70mL甲醇混合均匀。　　2)标准曲线　　分别准确移取不同浓度的儿茶素标准溶液各0.5mL于10mL具塞比色管中，加入2.5mL30g/L香草醛溶液，然后加入2.0mL30%硫酸溶液，30℃条件下避光反应20min，以试剂溶液为空白，在500nm处测定吸光度值，取标准液的浓度和吸光度数据经回归处理，回归方程y=45.22x+0.001，r=0.9995。结果表明，儿茶素浓度在0.004～0.02mg/mL范围内具良好的线性关系。　　2.2.2原花青素含量测定[5]　　将浓缩液加50%甲醇定

7、容至25mL量瓶中，取上述溶液1mL，用50%甲醇定容至25mL作为样品溶液;准确量取0.5mL样品溶液，按照上述标准曲线方法进行测定，加入2.5mL30g/L香草醛溶液，然后加入2.5mL30%硫酸溶液，30℃条件下避光反应20min，以样品溶液为空白，即0.5mL样品溶液+2.5mL甲醇+2.0mL30%硫酸溶液，在500nm处测定吸光度值。11　　2.2.3方法学考察　　1)精密度实验精密吸取样品溶液0.5mL，于25mL量瓶中，重复测定5次，得RSD为0.92%。2)稳定性试验精密吸取同一样品溶液0.5mL于25mL量瓶中，照“2.2.2”项下操作，

8、分别于显色后1、2、3、4、5h在500nm处测定吸