石斑鱼虹彩病毒SGIV硫氧还蛋白基因克隆表达及其功能的初步研究

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1、石斑鱼虹彩病毒(SGrV)硫氧还蛋白基因克隆表达及其功能的初步研究杰业：角详置朐学硬啦：李宁哥岬’知旰摘要硫氧还蛋白(n曲redoxin，耵Ⅸ)是一类分布广泛的小分子多功能蛋白，其广泛存在于原核、真核生物中，分子量约12kDa。它们在进化上相当保守，一般都具有一个相同的有氧化还原活性的Cys-Oly—Pro—Cys的氨基酸序列。在其保守的活化区域内含有具各氧化还原活性的二硫巯基和二硫醇．因此硫氧还蛋白在细胞内行使着各种不同的功能。石斑鱼虹彩病毒(Singaporegrouperiridovirus。SGIV)是大分子

2、DNA病毒，基因组结构为双链环状DNA，全长140，131bp，共有162个开放阅读框(Openreadingtiame,ORD，在正反链上分别编码41—126s个氨基酸。从SGIV克隆得到ORF070全长基因序列，SGIv的070基因全长459I,p，编码152个氨基酸，生物信息学分析该基因编码的是硫氧还蛋白，等电点为9．32，在N端的第75到第78个氢基酸是该蛋白的保守序列“C．x．X_c”．二级结构预测SGIV的硫氧还蛋白主要是以螺旋为主，约占66％，其余的为链结构，约占33％。序列相似性分析显示SGIVTRX

3、与已报道的TRX的同源性不高，其同源相似性只有约400,6左右，虽然它们的同源性不高，但是SGIVTRX具有TRX的保守位点。C．X．X-C”，因此我们推测SGIVtrx是一个新的基因，将SGIVtrx基因克隆到pGEx．4T．1载体中，在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出大量的带有GST接头的融合蛋白，其蛋白质分子量比预计的要小一些，将此蛋白免疫BALB／ea小鼠，得到其多抗血清，对纯化了SGlVTRX蛋白，进行了蛋白活性的测定，结果虽然不很稳定，但是仍然可以确定它具有TRX蛋白活性。构建了pEGFP-TRX载体，

4、将其转染到nIM细胞系中，进行了细胞定位的观察，结果Cloning，expressionandtentativefunctioncharactetizationofThioredoxinfromanovelmarinefishiridovirus，Singaporegrouperiridovirus(SGIV)纪：糍西小巧翕晰协∥t西pn’“dIAbstractThioredoxin(TRX)isawide，-spreadfunctionalprotein,whichhassubsequentlybeenshownt

5、obepresentinawidenumberofeukaryoticandprokaryoticspecies+Itsmolecularweightisapproximately12kDa．Trxsa"afamilyofprotelnsthathaveacomervedcatalyticsite(-Cys-Gly-Pro·cys')thatundergoesreversibleoxidationtothecystinedisulfide(Trx-S2)throughthetransferofreducingequi

6、valentsfromthecatalyticsitecysteineresidues(Cys)to，typically,adisulfidesubstrate(X-S2)．Therefore，TRXshavemanyfunctionsinthecells．Singaporegrouperh'idovirus(SOW)isa18rgeDNA咖sandtheentireSGIVgcnomeconsistsofl40，131nucieotidebp．Onehumkedsixty-twoopenreadingfmmes(O

7、KFs)fromtheSetLqeandantisenseDNAstrands，codingforlengthsvaryingfrom41to1,268alrtinoacids,wel-eidentified．ORF070wiLspredictedtoanovelgenewhichencodedTRX．SGIVnxgenecontahas459basepairs,codiIlg152aminoacidswithisoelecUicpoint(pI)0f9．32，Thebioinformaticanalysissugg

8、estedthatTRXcontainedaconservednucleotidebindingmotifrw．artheN-terminusoftheprotein-‘‘c-)【．X-C—Secoridsttg'tta'eofSGIVTRXconsistsof66％helixand33％chaiR．Alignmentofaminoacidse