番茄硫氧还蛋白基因trxf1的克隆及表达分析

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1、分类号：密级：无学号：2012107019单位代码：10759石河子大学硝士摩依铪弍番前硫氧还蛋白基因7>x//的克隆及表达分析学位申请人马展指导教师刘慧英申请学位门类级别农学硕士学科、专业名称蔬菜学研究方向设施园艺与无土栽培所在学院农学院中国•新疆•石河子2015年6月分类号：密级：无学号：2012107019单位代码：10759石河子大学硕士学位论文番茄硫氧还蛋白基因Trxf1的克隆及表达分析学位申请人马展指导教师刘慧英申请学位门类级别农学硕士学科、专业名称蔬菜学研究方向设施园艺与无土栽培所在学院农学院中国·新疆·石河子2015年6月Clon

2、ingandExpressionAnalysisofThioredoxinGeneTrxf1fromTomatoADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofAgricultureByMazhan(Soillesscultivationandhorticulturefacilities)DissertationSupervisor:Prof.Liuhui-yingJune,2015石河子大学学位

3、论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究生签名：时间：年月日使用授权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的

4、标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日摘要本研究以加工番茄品种“双丰87-5”作为试验材料，克隆了番茄硫氧还蛋白Trxf1基因，对基因在真核和原核方面进行了表达，进一步对番茄硫氧还蛋白Trxf1基因进行实时荧光定量分析，研究结果如下：1.本研究克隆了番茄Trxf1基因，对该基因编码的蛋白序列进行了氨基酸同源性和进化树分析，番茄Trxf1与同为茄科茄属的马铃薯的同源性最高，与模式植物拟南芥的同源性最低；系统进化树显示，番茄Trxf1基因与马铃薯Trxf1基因的亲缘关系最近，与拟南芥等十字

5、花科植物亲缘关系最远。2.利用克隆的Trxf1基因的编码区以及真核表达载体pBI121，成功构建了植物表达载体pBI121-Trxf1，采用农杆菌介导法转化番茄，提取植物DNA，经PCR、RT-PCR分析鉴定，结果表明，植物表达载体已成功整合到番茄基因组中。3.利用克隆的Trxf1基因的编码区成功构建原核表达载体pET32a-Trxf1。将重组质粒转化大肠杆菌Transetta(DE3)宿主菌，经IPTG诱导，获得相对分子量为25kD的融合蛋白，通过亲和层析纯化可溶蛋白并获得Trxf1融合蛋白。用抗His标签的单抗对纯化蛋白进行Westernbl

6、ot鉴定，证明纯化的融合蛋白是带有His标签的Trxf1蛋白。用可溶性融合蛋白pET32a-Trxf1免疫新西兰大白兔制备了Trxf1蛋白多克隆抗体Trxf1-KLH，ELISA测定抗体效价为1:6400，WesternBlot检测抗体特异性，证实Trxf1蛋白的多克隆抗体已制备成功.4.利用实时荧光定量PCR对盐胁迫下番茄硫氧还蛋白基因Trxf1的时空表达分析，该基因在番茄不同组织中均有表达，且同一时期在叶片中的表达量最高；而在茎和叶器官中，盐胁迫显著下调了该基因的表达。外源硒对盐胁迫下番茄Trxf1及硫氧还蛋白系统相关基因表达的影响研究试验中

7、，NaCl胁迫处理下调了加工番茄幼苗叶片Fd/Trx系统各基因的mRNA转录表达，而施用外源硒显著上调了NaCl胁迫处理期间加工番茄幼苗叶片各基因的mRNA转录表达；NaCl胁迫处理上调了加工番茄幼苗叶片NTS系统各基因的mRNA转录表达，而施用外源硒显著下调了NaCl胁迫处理期间各基因的mRNA转录表达。关键词：加工番茄；硫氧还蛋白；硒缓解；盐胁迫；基因克隆；蛋白表达；实时荧光IAbstractInthisstudy,tomatocultivar‘shuangfeng87-5’wasusedasexperimentmaterial,weclon

8、edtheORFofTrxf1genefromTomatoleavesbyPCRmethod,successfullyconstruct