牙鲆（paralichthys olivaceus）dazl基因的克隆、表达和功能初步研究

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1、尚斯儀）寸作々ＯＣＥＡＮＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＣＨＩＮＡ博±学位论文ＤＯＣＴＯ民ＤＩＳＳＥＲＴＡＴＩＯＮ牙巧（八舶知如ｏ／／ｖａｃｅｗ）基因的克隆、论文趣目：表达和功能初步研究Ｃｌｏｎｉｎｇ，ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＡｎａｌｙｓｉｓａｎｄＰｒｅｌｉｍｉｎａｒｙＳｔｕｄｉｅｓｏｎＦｕｎｃｔｉｏｎｓｏｆＪａｐａｎｅｓｅＦｌｏｕｎｄｅｒ英文涵目：Ｐａｒ幻ｌｉｃｈｔｈｓｏｌｉｖａｃｅｕｓｄａｚＧｅｎｅ（ｙ）ｌ作者：姜佳君巧导教师：张全启教巧学位类别：学术学位

2、专业名称：海洋生物学研究方向：海洋生物遗传学—，？－ｆ＾■ｔ谨＾乂此论文献给我敬爱的导师张全启教授姜佳君牙鱼平／／ｃ／？ｆｏ／／Ｖａｃｅｔｙｓ）ｉ／ａｚ／基因的克隆、（表达和功能初步研究学位论文答辩日期：加５ｇ利斗指导教师签字：：答辩委员会成员签字聋ｉＳ為／齊４＾独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研巧工作及取得的研巧成果。据我所知，，除了文中特别加标注和致谢的地方外论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研巧成果，也不包含未获得（注；

3、如没有其他需要特别声明的，本栏可空）或其他教育化构的学位或证书巧用过的材料一。与我同工作的同志对本研巧所做的任何贡献均己在论文中作Ｔ明确的说明并表示谢意。。学位论文作者签名：签字日期：么（；年ｒ月日学位论文版权使用巧权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意Ｗ下事项：１．学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被査阅和借阅。２．学校可将学位论文的全部或部分內容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采＂用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学中国＂

4、学术期刊（光盘版）电子杂志社用于出版和编入ＣＮＫＩ《中国知识资源总库》，授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签字：山Ｋ年ｒ月２＾日■签字日期：签字日期；７〇（ｒ年ｒ月日＊牙鲜（戶３Ａａ／／ｃ／７ｆ々ｊ／ｓｏ／／Ｖａｃｅｗ）ｏ（ａｚ／基因的克隆、表达和功能初步研究摘要近年来，关于生殖细胞的研充被全世界学者广泛关注，除在哺乳动物中有广泛深入的研究＾式外，在鱼类等化等脊椎动物中也逐渐开展起来，并取得很多进展。一一ｅｅｅ

5、ｄｎａｚｏｏｓｒｍ－ＤＡＺＬ（ｄｉａｉＺ家族的成员之，ｌｔｉｐｅｌｋｅ）是ＤＡ同时也是种重要的ＲＮＡ结合蛋白。现有研巧发现，从无脊椎动物到脊椎动物，沁Ｚ／特异地表达于雌性和雄性生殖细胞，可能在生殖细胞发育过程发挥重要作用。不少研巧也一Ｚ从些硬骨鱼中鉴定了舶／基因，并对其表达规律作出了详细的探讨。本研究克’隆和鉴定了牙鲜（ｆ吟Ｓｏ／ｉｖａｃｅＷ）ｄａｚ／基因，首次在硬骨鱼中发现了其－－ｍＲＮＡ的可变剪接形式．将这两种牙巧也Ｚ／ｍＲＮＡ称为化ｔ／ｏｚ／／和尸０沁別／／，探巧了它们在ｍＲＮＡ水平和蛋白水平的表达规律，并找到

6、了牙鲜ＤＡＺＬ的视ｍＲＮＡ，预测其功能。，，通过基因克隆等方法Ｚ／，５４Ｂｂ首先，得到了牙鲜如基因全长ｐ包括９’个外显子和９个内含子，９３非，其中外湿子Ｉ仅有ＡＴＧＨ个碱基内含子位于一翻译区，这些特征与许多ｄｆｌｚ／同源基因是相似的。对加２／等位基因在内含子６的序列上有差异。由于外显子８在转录或修饰时被測除，导致牙巧沈Ｋ／会产生一ｍＲＮＡ种较短的，与完整的转录本相比，缺失外显子８对应的５１ｎｕＤＡＺＬ同源多狀序列比对发现在ＲＮＡ识别基序（ＲＲＭ）中，有７个氨基酸位点可Ｗ将硬骨鱼和其它物种区分开来一。牙鲜ＤＡＺＬ

7、两种多肤序列与尖吻妒ＤＡＺＬ序列的致度最商，达到８０．６％和８０．４％。转录因子结合位点预測到ＧＡＴＡ、ＣＥＢＰ和ＳＯＸ等转录因子可能调控牙鲜成的转录。然后，／ｚＷ，通过反转录ＰＣＲ和实时定量ＰＣＲ验证了尸０沈如和尸０血都特－异地表达于牙巧的精巢和卵巢，且化血从办，Ｗ及巧胎发育的主要时期较化施Ｚ／／的表，达童略高，两者在巧巢的表达水平都明显髙于巧巢在化胎发育到原肠中，期么前的表达皇较商，之后的时期表达水平很低仅在出膜前有瞬时的升离。通过姐织切片原位杂交、ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和免巧组织化学等方法，证明化如ｚＷ和＞／〇舶Ｚ－

8、／／／主要定位于巧性和雄性生殖细胞，两者对应的蛋白产物也具有性腺特异的表这模式，同样集中表