炎症介质对肾小管上皮细胞中PPARγ和辅调节因子表达的影响及机制

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1、上海交通大学硕士学位论文炎症介质对肾小管上皮细胞中PPARγ和辅调节因子表达的影响及机制姓名：靳远萌申请学位级别：硕士专业：临床医学内科学（肾脏病学）指导教师：王伟铭20080401胞）为研究对象，利用Real-timePCR法、WesternBlot法、EMSA法及ELISA法观察炎症反应状态下，NF-κB、PPARγ、辅调节因子以及趋化因子的表达变化特点，探讨它们与炎症发展过程之间存在的关系。该课题的第一部分研究发现，不同浓度的TNF-α作用于HK-2细胞24小时后，MCP-1的mRNA表达水平随着刺激浓度的递增呈显著上调趋

2、势。TNF-α（10ng/ml）刺激HK-2细胞0.5h时MCP-1的mRNA水平即出现显著上调（P<0.05），4h时达到高峰（约为对照组的11倍，P<0.01），之后逐渐下降，至8h时仍然高于正常（P<0.05）。ELISA法检测发现，TNF-α（10ng/ml）作用于HK-2细胞后，MCP-1的蛋白分泌水平持续增高，至24h达到最高值，由基础水平时的15.52±1.05pg/ml升至40.5±0.97pg/ml（P<0.05）。IL-1β（10ng/ml）也可诱导MCP-1的分泌水平持续增高，刺激8h后即达到最高值，由基础

3、水平时的19.33±2.33pg/ml升至160.56±2.8pg/ml（P<0.01），之后缓慢下降，至24小时仍为50.82±1.25pg/ml（P<0.05）。上述结果表明TNF-α和IL-1β具有较强的致炎效应。第二部分的研究发现，TNF-α和IL-1β作用于HK-2细胞24h后，PPARγmRNA表达水平随着刺激浓度的增高均呈显著下调趋势。在时间梯度实验中发现，随着TNF-α和IL-1β（10ng/ml）刺激时间的延长，HK-2细胞中PPARγmRNA和蛋白质表达水平也均呈显著下调趋势。利用同批核蛋白进行EMSA检测的

4、结果显示，随着两者刺激时间的延长，PPARγ的DNA结合活性呈总体减弱趋势，至24h达到最低；NF-κB的活性均呈总体增强趋势，至24h达到高峰。这些结果表明，TNF-α和IL-1介导的炎症刺激均可以引起肾小管上皮细胞中的PPARγmRNA和蛋白质表达水平下降，同时引起PPARγ的DNA结合活性下降，而NF-κB－一种在炎症信号转导中起发挥关键作用的转录因子的活性增强。第三部分的结果显示，不同浓度的TNF-α和IL-1β刺激24h后，辅激活因子SRC-1、SRC-2、SRC-3和PGC-1随着刺激浓度的增高均呈现显著下调趋势(P

5、<0.05)，而辅抑制因子NCoR表现为显著上调(P<0.05)。选择10ng/ml作为最佳刺激浓度，发现TNF-α作用不同的时间后，SRC-3和PGC-1的mRNA水平在刺激1h时出现显著下调，分别降低了53％和46％(P<0.01)；SRC-1和SRC-2的mRNA水平在刺激2h后出现显著下调，分别降低了35％和41％(P<0.05)；NCoR则在刺激16h后出现显著上调（约为对照组的2.16倍，P<0.01）。而10ng/ml的IL-1β作用不同的时间后发现SRC-2和PGC-1的mRNA水平在刺激1h后分别显著下调了57

6、％(P<0.01)和48％(P<0.01)，之后缓慢出现上调，至24h分别较对照组下降35％(P<0.01)和44％(P<0.01)；SRC-1的mRNA水平在刺激2h后显著下调了43％(P<0.05)；NCoR在刺激8h后就出现显著上调。充分说明辅调节因子也积极参与TNF-α和IL-1β介导的炎症反应，并可能发挥重要的调节作用。通过上述实验，本研究首次发现在肾脏炎症过程中，PPARγ、辅调节因子、NF-κB和趋化因子MCP-1之间存在密切的联系。TNF-α和IL-1β诱导的NF-κB炎症通路激活可引起PPARγ及辅激活因子的表

7、达水平降低，而MCP-1和辅抑制因子的表达上调。这些结果证实，不仅PPARγ，其辅调节因子也积极参与肾脏炎症反应。这为我们从另一个角度认识肾脏间质纤维化的机制确定了新的方向。关键词：过氧化物酶体增殖物激活受体γ，辅激活因子，辅抑制因子，肿瘤坏死因子-α，白介素-1β，肾小管上皮细胞EFFECTSANDMECHANISMOFPROINFLAMMATORYMEDIATORSONEXPRESSIONOFPPARγANDITSCOREGULATORSINRENALTUBULAREPITHELIALCELLSABSTRACTPeroxis

8、omeproliferator-activatedreceptors(PPARs)areagroupofnucleartranscriptionfactorsthatregulategeneexpression.Recentworkhashighlightedt