ppar-γ在尿酸刺激的人近端肾小管上皮细胞中的表达及匹格列酮对nalp3炎症小体和il-1β表达的影响

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1、万方数据硕士学位论文(专业学位)PPAR-7在尿酸刺激的人近端肾小管上皮细胞中的表达及匹格列酮对NALP3炎症小体和IL.113表达的影响TheexpressionofPPAR7andtheeffectofpioglitazoneontheProductionofandNALP3inflammasomeandIL一113inuricacid—stimulatedrenaltubularepithelialCells(HK一2cells)硕士研究生:胡莎莎导师:叶志斌教授导师组成员:肖婧主治医师傅辰生副

2、主任医师复旦大学附属华东医院肾内科二零一三年四月万方数据目录英文缩略语注释⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一2Abstract⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..4材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯131.实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯131.1纽胞实验所用试剂及配制.-⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯131.2刺激因素及配制⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯131

3、.3PCR主要试剂及配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.141.4WesternBlot主要试剂及配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一141.5Elisa所用试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯161.6其它试剂及配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.171.7主要实验仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.182.实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯182.1细胞培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.182.2细胞干预⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.202~RT-P。CR检测⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2l2:4Western—Blot检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯242.5Elisa检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..272.6统计学方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯281万方数据1.各刺激因素对HK.2PPAR.vmRNA表达的时间效应⋯⋯⋯⋯..281.1OhPPAR一7mRNA的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯281.24hPPAR一7mRNA的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯291

5、:兰24hPPAR-TmRNA的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯301.4UA刺激组PPAR-TmRNA表达的时间效应⋯⋯⋯⋯⋯321.5MSU刺激组PPAR-7mRNA表达的时间效应⋯⋯⋯⋯.332.各刺激因素对HK一2PPARW蛋白表达的时间效应⋯⋯⋯⋯⋯.342.1OhPPAR吖蛋白的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯342.224hPPAR-7蛋白的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.352.348hPPAR.丫蛋白的表达⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯362.4UA刺激组PPAR-7蛋白表达的时间效应⋯⋯

6、⋯⋯⋯⋯372.5MSU刺激组PPAR.Y蛋白表达的时间效应⋯⋯⋯⋯⋯.383.尿酸刺激HK一2细胞中,匹格列酮对NALP3、IL一1p表达影响.393.I匹格列酮对NALP3蛋白表达的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯393.2匹格列酮对IL一1p蛋白表达的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.40讨{念⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.42结论和展望⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44综述⋯⋯⋯⋯⋯。⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.50发表论文情况说明⋯

7、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯58致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯59万方数据复旦大学硕士学位论文英文缩略语注释万方数据复旦大学硕士学位论文PPAR-7在尿酸剌激的人近端肾小管上皮细胞中的表达及匹格列酮对NALP3炎症小体和IL.1p表达的影响中文摘要背景:PPAR.Y是核受体超家族成员,参与多种因素所致炎症反应的调控。我们在前期研究中发现,尿酸刺激人近端肾小管上皮细胞(HK.2)可引起细胞内炎症小体NALP3以及细胞因子IL.1p表达增加。目的:观察尿酸刺激是否能够影响H

8、K.2的PPAR吖的表达及匹格列酮能否调节NALP3表达以及细胞因子IL.1B的分泌。方法L-,.将体外培养人近端肾小管上皮细胞(HK一2)分为7组:①空白对照组(CON):不添加刺激因素,仅加入等体积的培养液;②可溶性尿酸组:在培养液中加入可溶性尿酸(SUA200pg/m1);③晶体实验组:单钠尿酸盐结晶组(MSU200}tg/m1);④碱性磷酸钙对照组:碱性磷酸钙组(BCP200gg/m1);⑤LPS阳性对照组(LPS100gg/m1);⑥匹格列酮5

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