香兰素衍生物抑制DNAPKCS活性和抗癌细胞增殖及其机理研究

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1、中国人民解放军军事医学科学院硕士学位论文香兰素衍生物抑制DNA-PKcs活性和抗癌细胞增殖及其机理研究姓名：严雨倩申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：周平坤20060515957553军事医学科学院研究生学位论文独创性声明秉承军事医学科学院严谨的学风和科研作风，本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下独立进行的研究工作和取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢之处外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得星主壅堂叠堂睦或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说

2、明并表示了谢意。论文作者签字：妻虫箍签字日期：2翌翌鱼年-一乙月—L日军事医学科学院研究生学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解芏圭匡堂叠堂睦有关保留、使用学位论文的规定。特授权芏主匿堂盘堂瞳可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意将本学位论文的复印件和磁盘送交国家有关部门和机构。(保密学位论文在解密后适用本授权书)论文作者签字：至瘦箍签字日期：地丕年—厶月—生日指导教师签字：=j兰∑聋塑聋签字日期：2竺刍年—．L月—上日军事医学科学院硕士论文香兰紊衍生物抑制DNAPKes活性和抗癌

3、细胞增殖及其机理研究2006年5月香兰素衍生物抑制DNA．PKcs活性和抗癌细胞增殖及其机理研究摘要目的z本研究从香兰素衍生物中筛选抑制DNA-PKcs活性及抗癌细胞增殖更强的衍生物，且探讨其作用机理，旨在发现新的靶向性抗癌活性化合物。方法：采用MTT法、细胞克隆形成法和单细胞电泳检测化合物对细胞增殖活性、辐射敏感性和DNA损伤的影响；以p53蛋白特异肽段作为底物，321,-ATP掺入的磷酸化反应检测化合物对DNA-PKcs激酶活性的影响；流式细胞术、Hoechst33258荧光染色及DNALadder等检测细胞凋亡，透射电镜观测HepG2细胞自吞噬死亡；用原位免疫

4、荧光杂交和激光共聚焦显微镜观察纺锤体结构；荧光探针标记检测细胞内ROS变化；Westernblot检测化合物作用后凋亡相关蛋白和P13K／Akt信号通路相关蛋白变化。结果，筛选出抑制多种来源癌细胞增殖的香兰素衍生物BVAN3208，并申请了国家发明专利；结果表明BVAN3208介导细胞内DNA-PKcs的降解，抑制DNA-PKcs激酶活性；BvAN3208对所测试的近十余种癌细胞有显著杀伤效应，对正常肝细胞L02和正常人淋巴母细胞的毒性显著低于癌细胞；BVAN3208诱发细胞ROS水平增高和DNA损伤，诱发多种肿瘤细胞G2／M期阻滞及凋亡，破坏纺锤体的结构，诱发细胞

5、自吞噬死亡和有丝分裂灾难性死亡；BVAN3208抑制Akt蛋白磷酸化，影响gkt／OSr,313和Akt／Bad信号通路。结论：筛选出具有明显抑制癌细胞增殖和辐射增敏作用的香兰素衍生物Bw蚪3208，验证了Bw州3208作为DNA_PKcs抑制剂是一种有效的抗肿瘤化合物，BVAN3208能诱发肿瘤细胞多种死亡方式(凋亡、自吞噬死亡和有丝分裂灾难性死亡)，其至少从两个方面发挥抗癌活性，对癌细胞产生直接杀伤的抗增殖效应和对放射治疗或化疗的增敏效应。关键词：香兰素衍生物DNA—PKcs凋亡自吞噬死亡DNA损伤修复G2／M期阻滞辐射增敏军事医学科学院硕士论文香兰素衍生物抑制

6、DNA．PKcs活性和抗癌细胞增殖及其机理研究2006年5月InhibitionofDNA—PKcsactivitybyvanillinderivative，anditsanti—proliferationandmechanismsagainstcancercellsAbstractA蹦：Ourstudyistoscreentheeffectivechemicalofanticancerfromvamlhnderivatives．andtoevaluateitsacuvityofantiproliferationandinvestigateitsmechanisms

7、．METHODS：MTr．colony-formingabilityassaysandsinglecellgelelectrophoresisWereusedtoanalyzethec归toxici吼cellpmhferati∞，radiosensitivityandDNAdamage．Invitrophosphorylationofp53peptidesubstratewasperformedtodetectDNA—PKcskinaseactivity．FlowcytomeⅢ：ry,Hoechst33258，FDAfluorescentsstaimngandD