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1、复叶耳蕨提取物体外抗HIV-1整合酶活性的研究作者：李辉敏，殷嫦嫦，吴家忠，张磊【摘要】目的对鳞毛蕨科复叶耳蕨属植物复叶耳蕨不同提取部位体外抗HIV-1整合酶活性进行研究。方法在体外无细胞系统内采用酶联免疫吸附测定HIV-1整和酶的半数抑制浓度(IC50)。结果复叶耳蕨醋酸乙酯提取物、正丁醇提取物抑制HIV-1整合酶的半数有效浓度IC50分别为44.30，16.02μg/ml，水提取物抑制HIV-1整合酶的半数有效浓度IC50>100μg/ml。结论复叶耳蕨醋酸乙酯提取物与正丁醇提取物具有体外抑制HIV-1整合酶活性。【关键词】复叶耳蕨提取物;抗
2、HIV-I整合酶活性 Abstract：ObjectiveToevaluatetheanti-HIV-1INactivitiesofthedifferentextractpartsfromArachniodesexilisChing.MethodsHIV-1INreversetranscriptase,proteaseandintegraseweredetectedbyenzyme–linkedinmunosorbentassay.ResultsIntheexperimentofanti-HIVIN,theIC50ofthen-butanolextra
3、ctaceticetherextractwere44.30,16.02μg/ml,respectively.TheIC50oftheaqueousextractwashigherthan100μg/ml.ConclusionThen-butanolextract,aceticether6extractfromArachniodesexilisChinghavetheinhibitoryeffectonHIV-1INactivities. Keywords：Arachniodesexilis;Thedifferentextractedparts;Ant
4、i-HIV-1 复叶耳蕨ArachniodesexilisChing为鳞毛蕨科复叶耳蕨属植物,广泛分布于世界热带和亚热带湿润区域,以亚洲东部和东南部种类最为丰富,我国主要分布于长江流域以南地区及山东、河南等省,具有清热利湿、抗菌消炎、镇静作用,民间用于治疗急性黄疸性肝炎、关节炎、腰腿疼、痢疾、烫火伤等[1]。本课题组前期的初步研究发现：复叶耳蕨乙醇提取物在体外具有一定的抗HIV-1活性。本研究进一步探索复叶耳蕨不同提取部位体外抗HIV-1活性的作用。 1材料与方法 1.1样品制备复叶耳蕨材料采自九江市星子县，由九江学院药学系吴家忠副教授鉴定,采集
5、后取样品根部洗净,切碎,80℃6烘干，粉碎,过70目筛,以80%乙醇提取3次，合并滤液，经旋转蒸发仪减压浓缩至稠膏状。采用液-液分配法，将复叶耳蕨根部粗提物用适量蒸馏水溶解，然后加石油醚萃取3次，对水层依次用氯仿、醋酸乙酯、正丁醇分别萃取3次，将各步萃取组分浓缩，分别得稠浸膏，经国家新药筛选中心送至中国医学科学院医药生物技术研究所病毒药物实验室进行体外抗HIV-1整合酶活性筛选测试。 1.2体外抗HIV-1整合酶活性筛选测试采用酶联免疫吸附法测定：用合成的30个寡核苷酸作供体底物，用合成的20个寡核苷酸作为靶底物，96孔板包被供体底物加入纯化的HIV
6、-1整合酶,进行酶联接免疫吸附剂测定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay),检测靶DNA链转移的产物,以生物素标记的碱性磷酸酶系统显色,酶标仪测定OD值。在该体系中加入样品可用于筛选该酶的抑制剂。HIV-1IN：由中国医学科学院医药生物技术研究所病毒药物实验室提取并保存。阳性对照药：S-y，上海有机所提供。供体底物和靶底物:上海生工合成。样品处理：复叶耳蕨根部水提取部位样品临用前溶于水配成适当浓度，再作5倍稀释，4个稀释度;醋酸乙酯、正丁醇提取部位分别溶于DMSO配成适当浓度，再作5倍稀释，4个稀释度。 2结果 样品稀
7、释后加入供体底物包被96孔板中，并加入含有基因工程靶酶biotin-靶底物的反应Buffer中，在最佳反应条件下孵育，以生物素标记的碱性磷酸系统显色，测定405nm吸收值OD值，计算出各样品对HIV-1整合酶活性的抑制程度，得出各样品的半数抑制浓度(IC50)。结果见表1。表16复叶耳蕨各部分提取物抗HIV-1整合酶活性 3讨论 HIV-1是人类最为严重的致死性疾病,因此寻找有效的抗HIV-1药物,彻底攻克恶疾,是世界医学界重要的研究课题。近年来,合成类化学药在临床治疗方面取得了显著的进展。但由于HIV-1的高变异特性,接受药物治疗的大多数艾滋病患
8、者对至少一种药物产生耐药,因而研究开发更多结构新颖的抗艾滋病药物仍具有重要的意义[2]。由于化
