Compound 4880对apoE基因敲除小鼠颈总动脉套环诱导斑块的影响

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1、Compound48/80对apoE基因敲除小鼠颈总动脉套环诱导斑块的影响南华大学心血管病研究所唐雅玲肥大细胞与动脉粥样硬化肥大细胞(mastcell,MC)来源于骨髓多能干细胞,主要位于结缔组织内,其主要特征为胞浆内含有大量异染性颗粒,颗粒中含有多种生物活性成分。近年来对动脉粥样硬化斑块切除标本及尸检标本的研究表明，肥大细胞对动脉粥样硬化斑块的形成和发展起着重要作用。本研究所已在细胞学水平，多方面探讨了肥大细胞促进动脉粥样硬化发生发展的机制，得到的主要结论有：肥大细胞促进氧化低密度脂蛋白诱导的平滑肌细胞泡沫化；肥大细胞抑制巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇流出。到目前为止，有关肥大细

2、胞与动脉粥样硬化关系的研究主要是病理学观察和细胞学实验。本课题采用动物在体实验，将Compound48/80作用于颈总动脉套环的apoE-/-小鼠，探讨肥大细胞脱颗粒对斑块特性（包括大小、细胞成分、血管新生和出血）的影响及其可能机制。实验方法动物饲养40只10周龄雄性apoE-/-小鼠，高脂高胆固醇饲料（0.25％胆固醇＋15％猪油）饲养于SPF房中。右颈总动脉套环术实验分组术后4周随机分为两组，每组20只：实验组腹腔注射Compound48/80（0.5mg/kg）对照组腹腔注射相同体积的D-Hank，s隔日一次，共4次，第4次注射后半小时，采血、安乐死处死小鼠。原位灌流固定、取

3、材全自动生化分析仪测定血清中脂质含量比色法测定血清中类胰蛋白酶活性石蜡切片制作苏木素－伊红染色甲苯胺蓝染色vWF、α-smoothmuscleactin、Mac3、IL-1β免疫组织化学染色bFGFmRNA原位杂交及免疫荧光检测图像分析、统计学分析实验结果Compound48/80对血脂含量无明显影响表1血清脂质含量（mmol/L）组别TGTCHDL-CLDL-C对照组1.30±0.3712.74±0.930.46±0.1212.02±0.91实验组0.94±0.2211.74±3.560.53±0.0611.01±4.13实验组与对照组相比，P＞0.05Compound48/80

4、升高血清类胰蛋白酶活性表2血清类胰蛋白酶活性（u/L）组别类胰蛋白酶活性对照组0.36±0.10实验组0.57±0.13**与对照组相比，P＜0.05Compound48/80刺激颈总动脉外膜肥大细胞脱颗粒对照组实验组甲苯胺蓝染色（10×100）*与对照组相比，P＜0.05图1Compound48/80对套环侧颈总动脉外膜肥大细胞脱颗粒的影响BA套环加速颈总动脉斑块形成、Compound48/80增大套环侧颈总动脉斑块面积，并使套环侧颈总动脉狭窄程度加重对照组未套环侧实验组未套环侧对照组套环侧实验组套环侧颈总动脉石蜡切片HE染色（10×20）*与同组未套环侧相比，P＜0.05,﹟与

5、对照组相比，P＜0.05*与对照组相比，P＜0.05图2套环及Compound48/80对颈总动脉斑块面积及狭窄程度的影响ADCBABCompound48/80使斑块内平滑肌细胞数量增加对照组实验组α-smoothmuscleactin免疫组化（10×20）*与对照组相比，P＜0.05图3Compound48/80对套环侧颈总动脉斑块内平滑肌细胞的影响BACompound48/80使斑块内巨噬细胞数量增加对照组实验组Mac3免疫组化（10×20）*与对照组相比，P＜0.05图4Compound48/80对套环侧颈总动脉斑块内巨噬细胞的影响BABCompound48/80促进斑块内I

6、L-1β的表达*与对照组相比，P＜0.05图5Compound48/80对套环侧颈总动脉斑块内IL-1β表达的影响IL-1β免疫组化（10×20）实验组对照组BABCompound48/80促进斑块内血管新生对照组实验组vWF免疫组化（10×20）*与对照组相比，P<0.05Compound48/80对套环侧颈总动脉斑块内血管新生的影响AB图6Compound48/80促进斑块内bFGFmRNA的表达对照组实验组bFGFmRNA原位杂交（10×20）*与对照组相比，P<0.05Compound48/80对套环侧颈总动脉斑块内bFGFmRNA表达的影响AB图8Compound48/8

7、0促进斑块内bFGF的表达对照组实验组bFGF免疫荧光（10×20）*与对照组相比，P<0.05Compound48/80对套环侧颈总动脉斑块内bFGF表达的影响AB图9Compound48/80促进斑块内出血套环侧颈总动脉HE染色（10×40）*与对照组相比，P<0.05图10Compound48/80对套环侧颈总动脉斑块内出血的影响AB对照组实验组讨论本课题选用颈总动脉套环的apoE基因敲除小鼠作为动物模型。apoE基因敲除小鼠是动脉粥样硬化易感动物，在高脂高胆固