α-硫辛酸对apoe基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块稳定性的影响

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1、HEILONGJIANGMEDICINEANDPHARMACYFeb．2014，Vo1．37No．1·57·Q一硫辛酸对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块稳定性的影响刘春辉，李奕宏，王琳，刘君星(佳木斯大学附属第一医院心内科，黑龙江佳木斯l54003)摘要：目的：探讨a一硫辛酸(Ⅱ一LA)对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块稳定性及血脂的影响。方法：将30XApoE基因敲除小鼠随机分为模型组、a一硫辛酸、辛伐他汀组，高脂饮食16周后，分别给与生理盐水、a一-硫辛酸、辛伐他汀灌胃，另取1O只G5

2、7BL／6J小鼠正常饮食后给与生理盐水灌胃作为正常对照组。8周后处死小鼠，酶法检测血清血脂，氧化型低密度脂蛋白，HE染色观察主动脉粥样硬化斑块病理形态结构，图像分析法测定主动脉粥样硬化斑块面积及与管腔面积比值，胶原Mas—son染色检测斑块部位胶原含量及占斑块面积比值。结果：与高脂模型组比较，n—LA组TG，LDL，ox—LDL均明显降低，HDL明显升高(P<0．01)，TC降低(P<0．05)。与高脂模型组比较，a—LA动脉粥样硬化斑块面积及与管腔面积比值缩小(P<0．05)。胶原含量及占斑块面

3、积比值增加。结论：a—LA有稳定ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块的作用，其作用与降脂，抗脂质过氧化有关。中图分类号：R285文献标识码：A文章编号：1008—0104(2014)O1—0057～o2动脉粥样硬化所致的心血管疾病是目前威胁人类健康尾巴及全身各器官僵硬。的最主要原因之一。心血管病患者发生急性事件的主要病理1．2．4取材：将小鼠沿腹中线切开皮肤及皮下薄膜，暴露基础不是血管狭窄的严重程度，而是斑块变得不稳定发生破肺、肝、胃、肠、脾、胰腺、肾等各器官。将各组织器官切除后，裂，并继发血栓形

4、成，故稳定斑块的药物治疗成为研究热点。沿着脊柱将心脏和主动脉至双侧髂总动脉完整剥离。本研究检测a～LA对Apoe基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑1．2．5将主动脉和心脏固定与4多聚甲醛24h。块及血清血脂的影响，探讨a—LA对动脉粥样硬化斑块稳1。2．6石蜡切片制作：每只小鼠从主动脉根部三尖瓣处至定性的作用及机制。主动脉弓石蜡连续切片，5／*m，40张。1材料与方法1．2．7HE染色。1．1动物模型制备分组及给药1．2．8胶原Masson染色：胶原纤维呈绿色，弹性纤维星棕色至深棕色，肌纤维呈红色采用8周

5、龄雄性Ap0E一／一小鼠3O只，随机分为模型组，辛伐他汀阳性对照组及a一硫辛酸组。另取同周龄雄性1．3检测指标C57BL／6J小鼠lO只做正常对照组，在清洁级环境中饲养，模1．3．1酶法检测血清血脂TG、TC、HDL—C、LDL—C及ox型组，辛伐他汀阳性对照组及硫辛酸组饲以含脂肪21(wt／—LDL，具体操作按试剂盒进行。Wt)，胆固醇0．15(wt／wt)的高脂饲料。正常对照组给予正1．3．2HE染色检测主动脉粥样硬化斑块形态和结构，医学常饮食，共16周。温度控制在18～26℃，湿度55％左右

6、，光照图像分析系统测量血管管腔面积(LA)、粥样斑块面积(PA)、时间为12h，动物饲养笼具、引水瓶定期消毒，所用垫料高压粥样斑块面积与管腔面积之比(PA／LA)。灭菌，饲养房内定期紫外灯消毒。16周后辛伐他汀阳性对照1．3．3主动脉胶原Masson染色检测斑块部位胶原含量及按照成人每日辛伐他汀20mg折合为小鼠剂量2．5mg／kg·d占斑块面积比值。Masosn染色，PIP图像分析软件测量主动灌胃，硫辛酸组给予硫辛酸30mg／kg·d灌胃，模型组和对照脉根部胶原面积(CA)，计算胶原血管面积比(

7、CAC／VA)。组给予生理盐水灌胃，连续给药8周。1．4统计学方法1．2动物标本制备与取材采用SPSS16．O软件处理。计量资料以均数士标准差表1．2．1麻醉：1戊巴比妥钠，45mg／kg腹腔麻醉。示，计量资料两组比较用t检验，以P<0．05为有统计学意1．2．2取血：动物禁食12～14h，麻醉后，无菌条件眶静脉取义。血，不抗凝，4℃，2000rpm×10min，取上层血清，分装后冻存2结果于～8O℃冰箱备用。2．1各组血清血脂及ox—LDL1．2．3心脏灌流：沿胸骨中线将小鼠皮肤剪开，用镊子将皮

8、与正常对照组比较，高脂模型组TG，TC。LDL，OX—肤与皮下组织分离。在中线处作一切口，沿着中线将肋骨剪LDL均明显增高，HDL明显降低(P<0．01)。与高脂模型断，暴露胸腔和心脏。将小鼠右心耳部位剪一切口，然后迅速组比较，a—LA组TG，LDL，OX—LDL均明显降低，HDL明在心尖部位插入注射器针头，缓慢匀速注入2OraLPBS开始显升高(P<0．O1)，TC降低(P<0．05)。a—LA组TC，灌流心脏，5min内完成；然后换成4多聚甲醛20mL，5minLDL高于辛伐他