小麦面筋蛋白的酶解及其阿片肽的研究

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1、江南大学博士学位论文小麦面筋蛋白的酶解及其阿片肽的研究姓名：孔祥珍申请学位级别：博士专业：粮食、油脂及植物蛋白工程指导教师：周惠明20070101江南大学博士学位论文对具有良好功能性质的AWGH(DH=5％)采用活性炭进行了脱苦处理，结果发现活性炭用量为0．5～1．0％时，可基本满足脱除苦味的需要。对其粘度的研究发现，AwGH(DH=5％)浓度在5～20％之间变化时，其粘度变化很小，当浓度上升至30％以上时，粘度明显增大，但仍具有较好的流动性。对其氨基酸组成的研究发现，与原料小麦面筋蛋白相比，其氨基酸组成没有明显的变化。采用豚鼠回肠离体检定

2、法对不同蛋白酶水解小麦面筋蛋白制备的酶解物的阿片活性进行了测定，结果表明，AWGH、PWGH和PPWGH具有较好的阿片活性，其IC50值分别为1．2la：0．25、1．574-0．21和1．29士0．38mg蛋白／mL。采用NGl08—15细胞生物学检定法对小麦面筋蛋白酶解物的阿片活性进行研究，结果发现，AWGH对腺苷酸环化酶(AC)的活性具有刺激作用；PWGH则对AC的活性具有抑制作用，其AC抑制率为39．66％；PPwGH的阿片活性较高，其AC抑制率达到50．13％。采用小鼠热板法和小鼠醋酸扭体法进行镇痛药效的整体动物实验结果表明，AW

3、GH、PWGH和PPWGH具有较好的镇痛作用。在小鼠热板法实验中，其痛阈提高百分率分别为77．794-13．82％、81．224-9．69％和79．78a：22．77％；在小鼠醋酸扭体实验中，其扭体抑制率分别为38．254-2．98％、57．824-3，04％和52．434-3，87％。整体动物实验与离体实验结果基本一致。小麦面筋蛋白酶解物AWGH和PPwGH经过离子交换树脂脱盐和超滤(MwC03．000)处理后，所得小麦面筋蛋白源阿片肽蛋白质含量在90％以上，灰分含量在1．5％左右，且处理后的AWGH和PPWGH的IC50值分别约减小至处

4、理前的1／2和1／3。采用高效液相色谱研究表明，AWGH和PPWGH的相对分子质量分布在2000以下的组分占多数。经过凝胶过滤色谱、半制备RP—HPLC和RP．HPLC分离纯化，从AWGH中得到一个具有较强阿片活性的组分AWGH．Ci4．1，从PPWGH中得到两个具有较强阿片活性的组分PPWGH．c4．1和PPWGH-c10-2，采用MALDI．TOF—MS／MS分析鉴定其结构，得到氨基酸序列分别为LSPHK、GCKSPH和APSAPT。LSPHK、C-CKSPH和APSAPT均可抑制离体豚鼠回肠的收缩，Ic50值分别为106，68、79．

5、61和53．40taM；NGl08．15细胞生物学鉴定方法实验表明，LSPHK可以刺激AC活性。引起胞内cAMP含量的增大：GCKSPH和APSAPT均可以抑制AC活性，引起胞内cAMP含量的减小，其AC抑制率分别为81．034-0．42％和83．29-10．38％。且这些效应均可被纳洛酮所逆转。关键词：小麦砸筋蛋白，酶水解，功能性质，阿片活性，镇痛，分离纯化，活性肽llABSTRACTWheatglutenasallimportantby-productofwheatstarchindustryisproducedworldwideine

6、nonnousquantitieswithannualyieldabout600，000tonsintheworld．Wheatgluten，availableinlargeanlountsandatrelativelylowcost，isrecognizedasagoodresourceofdietaryprotein．Nowwheatglutenismainlyusedasanadditivetoimprovethepropertiesofflourandalsousedintheanimalfeedingindustry．Withth

7、eexpandingofwheatstarchproduction,thetraditionalmarketforwheatglutenhasbeensaturatedanditiseconomicallydesirabletoextenditsutilizationinbothinsideandoutsidefoodindustries．Inthisdissertation，enzymatichydrolysisisusedtohydrolyzewheatgluten,tryingtoextenditsapplicationfield．W

8、heatglutenhydrolysates(WGHs)werepreparedandfunctionalpropertiesandopioidactivityofWGHswer