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1、上海交通大学硕士学位论文TGF-β1对胰腺癌细胞EMT及侵袭性的影响姓名：封明轩申请学位级别：硕士专业：外科学（普外科）指导教师：费哲为20070501上海交通大学硕士论文上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海交通大
2、学硕士论文上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日：年月日上海交通大学医学院硕士毕业论文TGF-β1对胰腺癌细胞EMT及侵袭性
3、的影响摘要背景胰腺癌是消化系统恶性程度高、预后差的恶性肿瘤之一，总体五年生存率1%。中国上海的胰腺癌发病率为10/10万,已接近欧美等高发地区。胰腺癌属于高度恶性肿瘤，侵袭性强，早期常常已经侵润大血管，神经等，造成手术切除难度大,严重降低生存率。近年来,发现TGF-β通路在肿瘤晚期发生异常,癌细胞在其作用下显现出一些间质细胞的特性,变得更富侵袭性,多数学者将这一现象称位上皮细胞间质变（EMT）,但其中的一些机制仍然未得到阐明。本实验从形态学，侵袭性以及相关基因表达变化方面研究了胰腺癌细胞BxPc-3在TGF-β1
4、长时间作用后发生EMT（上皮间质化转变）的情况，以及对侵袭性的影响，同时探索其在细胞黏附方面的机制。目的使用TGF-β1引发胰腺癌细胞（BxPc－3）上皮间质变(EMT)，影响其侵袭性，探索其分子学机制。证实胰腺癌细胞具有EMT的倾向，为进一步的干预性试验做好理论基础。方法培养胰腺癌细胞BxPc-3。用TGF－β1进行诱导。试验分为浓度相关性和时间相关性两组：浓度相关组为分别以不同剂量的TGF－β1（5，10，20,50ng/ml）作用细胞24小时；时间相关组为以10ng/mlTGF－β1作用细胞,分别持续0,4
5、,7,14天。倒置显微镜下观察细胞形态学的改变；使用transwell-matrigel体外侵袭试验分别测定不同剂量，不同持续时间对胰腺癌细胞BxPc-3侵袭性的影响。用逆转录-聚合酶链反应法（RT－PCR）试验测试两种钙粘连蛋白（E－cad，N－cad）的表达变化。结果TGF-β1对BxPc-3形态学的影响：BxPc-3细胞在TGF-β1刺激下逐渐由原来的圆形片团状生长变化为长梭形，并且逐渐分散。Transwell-matrigel体外侵袭试验:剂量相关性试验组，在不同剂量TGF-β1刺激下，侵袭细胞平均数分别
6、为74.8±5.675(0ng/ml),76.8±6.181(5ng/ml),78.0±4.301(10ng/ml),73.6±4.450(20ng/ml),77.6±4.930(50ng/ml)P>0.05,各剂量之间差异无显著统计学意义；时间相关性试验，各持续时间下侵袭细胞平均数分别为：77.4±4.0371上海交通大学医学院硕士毕业论文（0天），104.2±4.494（4天）,139.6±4.775（7天）,205.5±8.456(14天),P<0.01,有极显著统计学差异。逆转录-聚合酶链反应法（RT－P
7、CR）试验检测癌细胞中两种钙粘连蛋白（E－cad，N－cad）的表达变化：在浓度相关性试验组中，E－cad的相对表达分别为35.40(0ng/ml),37.43(5ng/ml),36.55(10ng/ml),34.24(20ng/ml),36.47(50ng/ml),P>0.05，未见显著变化；在时间相关试验中，E－cad表达随刺激时间延长逐渐下降，分别为38.57(0天),38.42(4天),21.36(7天),9.82(10天),3.28(14天),P<0.01从第4-7天开始有显著差异,到14天时几乎表达极
8、少；N－cad在两试验组中都未见明显表达。结论TGF-β1有增加胰腺癌细胞侵袭性的作用，该作用很有可能是通过上皮间质变而产生，而这一作用需要较长时间的持续刺激。同时钙粘连蛋白表达的变化是重要的分子学机制之一。关键词胰腺癌转化生长因子β(TGF-β1)上皮间质变(EMT)侵袭性上皮型钙粘连蛋白(E-cad)2上海交通大学医学院硕士毕业论文TGF-β1’simpactonEM
