兔抗hnrnp b1多克隆抗体的制备、纯化及验证 毕业论文

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1、本科生毕业论文（设计）题　　目兔抗hnRNPB1多克隆抗体的制备纯化及验证姓　　名学号2010413102院　　系生命科学学院专　　业生物工程指导教师职称副教授2014年5月17日曲阜师范大学教务处制目录摘要1关键词1Abstract1Keywords11.引言11.1hnRNP的结构与功能11.2hnNPs与肿瘤疾病发生发展的机制研究进展21.3关于hnRNPB121.4多克隆抗体31.5间接竞争ELISA法31.6抗体的分离纯化方法32材料与方法42.1材料与仪器42.2主要试剂42.3兔抗人hnRNP多克隆抗体的制备52.3.1抗原准备52.

2、3.2取空白血清52.3.3动物免疫52.3.4多抗血清效价的检测52.3.5间接非竞争ELISA检测方法52.4兔抗人hnRNP多克隆抗体的纯化52.5westernbloting对兔抗hnRNPB1多抗的验证62.6免疫沉淀对兔抗hnRNPB1多抗的验证72.7免疫组化对兔抗hnRNPB1多抗的验证73.结果与分析83.1兔抗hnRNPB1多抗的效价及纯化产量83.2兔抗hnRNPB1的western验证83.3兔抗hnRNPB1的免疫沉淀验证93.4兔抗hnRNPB1多克隆抗体的免疫组织化学表达94讨论与展望10参考文献10致谢11兔抗hnR

3、NPB1多克隆抗体的制备、纯化及验证摘要：目的：自主制备抗hnRNPB1多克隆抗体，将其纯化并验证多抗的特异性。方法：以自行设计的偶联多肽hnRNPB1为抗原免疫新西兰成年兔制备兔抗hnRNPB1多克隆抗体，用间接非竞争ELISA的方法测定效价后进行亲和层析，将纯化后的多抗用western、免疫组化、免疫沉淀的验证方法进行鉴定并验证其特异性。结果：经偶联多肽免疫动物后，ELISA检测抗血清效价为1:10000，用亲和层析法进行纯化得到A兔34mg、B兔41mg的抗体，western以及免疫沉淀分析在37KD有清晰条带，为hnRNPB1蛋白。免疫组化

4、分析在光学显微镜下观察到hnRNPB1阳性反应产物呈棕黄色，颗粒状。结论：成功制备兔抗hnRNPB1多克隆抗体经ELISA效价测定具有较高纯度；经western、免疫沉淀、免疫组化验证具有较好的特异性，可以满足实验要求，为进一步研究hnRNPA2/B1相互作用蛋白的种类鉴定以及相互作用蛋白网络的构建提供基础。关键词：多克隆抗体、不均一性核糖核蛋白B1、ELISA、免疫亲和层析、westernblottingThepreparation、purificationandverificationofrabbitantihnRNPB1polyclonala

5、ntibody.StudentmajoringinBioengineeringLiuYuTutorLiuJinfengAbstract:Objective:Toprepareanti-hnRNPB1polyclonalantibodyandpurifyit,thenverifyitsspecifictionwithvariousofmethods.Methods:WeusedesignedcouplingpolypeptidehnRNPB1asantigenimmuningadultNewZealandrabbit,whichisawayofpre

6、parationofrabbitantihnRNPB1polyclonalantibody.AfterdeternminingthepotencyofpolyclonalantibodywiththeindirectnoncompetitiveELISAmethod,useaffinitychromatographymethodtomakeapurification.Thenwemakeavalidationwhichusemethodsofwesternblotting、Immunohistochemistryandimmuneprecipita

7、tiontoidentifyandverifyitsspecificity.Results:Aftercouplingpolypeptideimmuneanimals,antiserumtiterofELISAdetectionis1:10000.RabbitA34mgandB41mgofrabbitantibodyispurifiedbyaffinitychromatography.ForhnRNPB1protein,westernandtheanalysisoftheimmuneprecipitationhasclearbandsin37kd.

8、Observationofimmunohistochemicalanalysisunderopticalmicroscop