毕业设计（论文）-鲤科鱼类DNA的提取与扩增

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1、武汉轻工大学毕业论文毕业论文题目鲤科鱼类DNA的提取与扩增姓名学号090214408院（系）生物与制药工程学院专业生物科学指导教师2013年6月8日目录摘要11.前言31.1DNA的提取方法31.1.1浓盐法31.1.2阴离子去污剂法41.1.3苯酚抽提法41.1.4Chelex-100提取法41.1.5磁珠提取法41.2DNA的检测方法51.2.1DNA的琼脂糖凝胶电泳51.3PCR技术51.4鲤科鱼类简介81.4.1常见的鲤科鱼类82.材料与方法102.1材料102.2实验仪器102.3主要试剂102.

2、4实验方法112.4.1苯酚/氯仿法提取基因组DNA112.4.2试剂盒法112.5DNA的PCR扩增及电泳133．结果143.1样品DNA的提取143.2样品mtDNAD-loop序列的扩增144.讨论15谢辞17参考文献18摘要本文采用标准的酚/氯仿法和试剂盒法提取鲤科鱼类翘嘴鲌的基因组DNA，并对鱼样线粒体DNA控制区进行了扩增。结果表明，酚/氯仿法和试剂盒法提取鲤科鱼类翘嘴鲌的基因组DNA，经凝胶电泳检测所提取样品DNA条带清晰，两种方法所提鱼样基因组DNA质量较好。采用所提取样品DNA对鱼样线粒体

3、DNA控制区进行了扩增，结果表明，基因组DNA可扩增出清晰可辨的条带，重复性好。关键词：DNA提取技术；PCR技术；鲤科鱼类18AbstractThegenomicDNAofCulteralburnuswasextractedbyusingthestandardphenol/chloroformextractionmethodandassaykitsandthemitochondrialDNAcontrolledregionsoffishsampleswereamplified.AfterGelelectr

4、ophoresis,theresultsshowedthatthebandsofgenomicDNAofCulteralburnuswereclear,andthequalityofgenomicDNAofthosesampleshowedbetterbyusingthetwoextractionmethods.UsingthemitochondrialDNAcontrolledregionsoffishsampleforamplification,andtheresultsalsoshowedthatth

5、emitochondrialDNAcontrolledregionsofthesampleswereamplifiedandthebandsamplifiedwerelegibleandreproducible.Keywords:DNAExtractionTechnique;PCRTechnique;Cyprinids181.前言1.1DNA的提取方法DNA是大分子高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度。DNA对紫外线有吸收作用，当核酸变性时，吸光值升高；当变性核酸可复性时，吸光值又会恢复到原

6、来水平。温度、有机溶剂、酸碱度、尿素、酰胺等试剂都可以引起DNA分子变性，即使得DNA双键间的氢键断裂，双螺旋结构解开。尽管双链DNA在化学上是稳定的，但它在物理上仍是易碎的。高分子质量DNA长而弯曲，仅具有极微的侧向稳定性，因而容易受到最柔和的流体剪切力的伤害。双链DNA在溶液中随机卷曲，并由于碱基堆积力和DNA骨架上磷酸基团间的静电排斥力而变得粘滞，由吸液，震荡，搅拌所导致的水流对粘滞的盘绕物产生拖拉力，能切断DNA的双链。DNA分子越长，断裂所需的力越弱。因此，基因组DNA分子易于被常规分离基因组DN

7、A过程中产生的力切断[1]。并且DNA修复（DNArepairing）存在修复机制，DNA修复是细胞对DNA受损伤后的一种反应，这种反应可能使DNA结构恢复原样，重新能执行它原来的功能；但有时并非能完全消除DNA的损伤，只是使细胞能够耐受这DNA的损伤而能继续生存。也许这未能完全修复而存留下来的损伤会在适合的条件下显示出来（如细胞的癌变等），但如果细胞不具备这修复功能，就无法对付经常在发生的DNA损伤事件，就不能生存。所以研究DNA修复也是探索生命的一个重要方面，而且与军事医学、肿瘤学等密切相关。对不同的D

8、NA损伤，细胞可以有不同的修复反应。双链DNA是非常惰性的化学物质。它潜在的反应基团隐藏在中央螺旋内，并经氢键紧密连接，它的碱基对外侧受磷酸和糖形成的强大环层的保护，这种保护因内在的碱基堆积力而进一步加强。如此坚固的结构和保护，使得DNA在现代犯罪现场和古代墓葬等完全不同场所比大多数细胞内其他成分保存的时间更长[2]。1.1.1浓盐法利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1MNacl