本科毕业论文--不同方法对鳟鱼基因组DNA提取效果的影响

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1、不同方法对鳟鱼基因组DNA提取效果的影响本科毕业论文题目不同方法对鳟鱼基因组DNA提取效果的影响学院动物科学技术学院专业毕业届别姓名指导教师职称甘肃农业大学教务处制二〇一一年六月14不同方法对鳟鱼基因组DNA提取效果的影响目录题目……………………………………………………………………2摘要……………………………………………………………………21文献综述………………………………………………………………21.1甘肃省虹鳟鱼种质资源………………………………………21.2国内外虹鳟鱼分子水平研究进展……………………………2

2、1.3研究目的及意义……………………………………………………32材料与方法……………………………………………………………32.1实验材料……………………………………………………………32.1.1实验样品…………………………………………………………32.1.2主要仪器…………………………………………………………32.1.2主要试剂………………………………………………………42.1.4溶液配制………………………………………………………42.2基因组DNA提取方法………………………………………………52.3基因组DNA

3、检测……………………………………………………62.3.1琼脂糖凝胶电泳检测…………………………………………62.3.2DNA纯度及浓度测定…………………………………………63结果与分析…………………………………………………………63.1琼脂糖凝胶电泳检测结果………………………………………63.2ND-1000型分光光度计检测结果…………………………………74讨论……………………………………………………………………95结果…………………………………………………………………10参考文献…………………………………………

4、……………………11摘要…………………………………………………………………13致谢…………………………………………………………………1414不同方法对鳟鱼基因组DNA提取效果的影响不同方法对鳟鱼基因组DNA提取效果的影响摘要为虹鳟鱼遗传特征研究奠定基因组DNA提取的实验基础，本研究以虹鳟鱼肌肉组织为材料,按照常规的酚-氯仿抽提法和另外设计的一种不同方法进行基因组DNA提取并比较其效果。结果表明,采用常规酚-氯仿抽提法提取的基因组DNA受蛋白质污染小；而另一种未加蛋白酶K的DNA提取法由于蛋白质未被消化降解且抽提次

5、数较少，虽提取的DNA浓度较高但蛋白质残留较为严重，这对于PCR扩增的影响较大。因此，使用蛋白酶K的常规酚-氯仿抽提法提取的基因组DNA适于PCR扩增等后续实验研究。关键词鳟鱼；基因组DNA；提取；效果；比较1文献综述1.1甘肃省虹鳟鱼种质资源虹鳟(Oncorhynchusmykiss)属鲱形目、鲑科,是我国淡水养殖的主要经济鱼类。原产于美国加利福尼亚,1874年经人工迁徙驯化已在世界各地进行养殖,1959年从朝鲜移入我国黑龙江省,目前国内已有20多个省(市)开展了虹鳟养殖。甘肃是国内引进虹鳟试养(1977年)较

6、早的省份之一，在20世纪90年代初以冷水性鱼类虹鳟的突变体为材料选育成了甘肃金鳟新品系，2007年4月被农业部列为适宜在全国具冷水资源的地区养殖的优良品种。其与目前国内外养殖的道氏虹鳟、日本金鳟相比，甘肃金鳟(Oncorhynchusmykissaguabonita)体色更艳丽，且性情温顺、生长速度快、抗病力强、个体大、耐低氧、肉质细嫩，具有很高的观赏价值和食用价值等特点，深受渔业生产者和消费者的青睐，在国内具有很强的市场竞争能力。1.2国内外虹鳟鱼分子水平研究进展随着分子生物学的快速发展，国内外对虹鳟在分子水平

7、上也展开了多方面的研究工作。在Young等(1998)就建立了虹鳟二倍体的遗传连锁图谱[1],而后Sakamoto等(2000)又建立了微卫星相关的精细连锁图谱[2]。功能基因研究方面，虹鳟生长激素基因的cDNA于1986年被克隆并在大肠杆菌中表达[3]，随后虹鳟生长激素基因的二种结构类型又被发现[4]。近年来，虹鳟生长激素基因的内含子与激素调节、垂体表达关系等也有研究报道[5,6]；同时，利用基因型频率计算雌雄间遗传差异和亲子鉴别技术进行虹鳟鱼亲本的选择已有初步研究成果[7]。在鳟鱼的遗传多样性及遗传资源研究方

8、面，Robert(2003)和Riho等(2007)14不同方法对鳟鱼基因组DNA提取效果的影响在分子水平上对虹鳟的遗传多样性及其遗传资源评价开展了卓有成效的研究[8]。在国内，张艳萍等(2008)采用RAPD技术,对甘肃金鳟的人工繁殖群体进行了遗传多样性研究,并和日本金鳟、道氏虹鳟的遗传结构进行了比较[9，10]。赵莹莹等（2006）利用微卫星标记对黑龙江水产研究所的6