祛湿化瘀方对游离脂肪酸诱导的hepg2细胞脂毒性的干预作用

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1、祖国医学文献中未见有“脂肪肝”病名记载，但根据其发病特点，可将本病归属于中医的“胁痛”、“积聚”、“痰浊”、“肥气”等范畴。大多数医家认为脂肪肝的发生与饮食所伤(饮食不节，或饥饱失常，或嗜酒过度，或嗜食肥甘厚味)和情志不遂(长期忧郁或恼怒)有关，其病多实证，痰瘀互结是其基本病机，亦有论及气滞、湿浊、湿热者。脂炎消煎剂是我们结合临床经验和现代药理研究而确立组方。全方以黄英益气健脾，制何首乌、五味子补肝肾，益精血；莪术行气、活血、消积，丹参活血通络，祛肝经之瘀，两药相合,增强肝脏血运，消除积聚脂肪；泽泻利水、渗湿、泄浊，切中本病湿痰郁积的病机；荷叶芳香轻宣、升清降浊，具有化湿醒脾作用，可升发清

2、阳、分利清浊，为佐使药。诸药配伍，切中脂肪肝气滞痰瘀的主要病机，扶正祛邪，标本兼治，共奏健脾补肾，祛湿化痰，行气活血之功效。我们前期实验研究结果也表明，脂炎消煎剂能降低实验大鼠血清中的脂质含量，减少肝组织的脂肪沉积，保护肝细胞，其作用机理可能在于改善了脂肪沉积的肝脏组织的血液循环，改善了紊乱的脂质代谢，调节脂质过氧化过程，从而增强了肝细胞的抗损伤和修复能力，一定程度上恢复肝细胞的生理功能⑺。本方紧扣脂肪肝之病因病机，结合现代医学研究成果，根据脂肪肝的发病机制，针对性地选药组方。本研究结果显示，治疗组总有效率、肝功能指标和血脂水平等均得到较明显的改善，与对照组比较差异有显著性意义，表明脂炎消

3、煎剂治疗非酒精性脂肪性肝有确切疗效。参考文献(略)祛湿化瘀方对游离脂肪酸诱导的HepG2细胞脂毒性的干预作用张M胡义扬上海中医药大学附属躇光医院・上海中医药大学肝病研究所(201203)近年来，非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholicfattyliverdisease,NAFLD)发病率日趋上升，目前中医药已成为国内临床脂肪肝治疗的重要手段。我们在既往临床和实验研究的基础上，进一步反复筛选组方，发现以茵陈、虎杖、姜黄等中药组成的“祛湿化瘀方”对促进脂肪肝的逆转以及改善其临床症状和某些实验室指标行之有效。前期采用CCL高脂低蛋白饮食诱导的体内脂肪肝模型发现，该方能显著降低模型组中升高的

4、肝组织TG、FFA和血清TNF-a含屋"。本实验旨在通过建立和采用FFA诱导肝细胞脂肪变性和TNF-a分泌的体外模型，观察同等剂量FFA作用下，祛湿化瘀方对其脂蛊性的影响，以进一步揭示该方的主要作用机理。现报道如下。1材料和方法1.1材料(1)细胞株：采用人肝母细胞瘤细胞株HepC2,购自屮国科学院上海细胞生物学研究所细胞库。(2)实验动物：SD雄性大鼠，SPF级，300g左右。购自中国科学院上海实验动物中心。用于制备药物血清。(3)药物和主要试剂：祛湿化瘀方(主要由茵陈、虎杖、姜黄等组成)由校科技中心协助制备，配制成含生药1.16g/ml的祛湿化瘀方药液。棕狗酸、油酸，均购自SIGMA公

5、司。胎牛血清购自上海实生细胞生物技术有限公司。MEM培养基干粉，购自美国Gib®公司。TG.血清ALT、乳酸脱氢酶(LDH)、考马斯亮兰蛋白测定试剂盒购自南京建成生物制品研究所；总RNA抽提试剂盒TRIZOL,购自INVITROGEN公司。cDNA合成试剂盒，PCR试剂盒均为Fermentas公司产品。大鼠血清TNF-a检测试剂盒，购自R&D公司。多克隆羊抗大鼠TNF-a抗体，为R&D公司产品。多克隆兔抗羊•II抗，为JacksonImmunoresearchLalwraioriesInc公司产品。TNFa引物为5'-CATGATCCGAGATGTCGAACTGGC-3'和5'-CrGGC

6、TCAGCCACTCCAGC-3,,合成自生工公可。•1・2方法（1）药物血清制备祛湿化瘀药物血清制备采用我所既往方法。用药组液服中药（祛湿化瘀方）提取液，按10mb

7、,参考国外文献剂量），分别在6h、12h、18h、24h、30h收集细胞，参考HeiderJG方法提取细胞层总脂质，测TG含虽。确定模型时间点。（3）药物血清毒性试验•分别设10%、20%、30%浓度的胎牛血清组、正常大鼠血清组、药物血清组，每组4皿，作用于HepG224小时后，取上清检测LDH活性。（4）分组用药及检测指标HepG2培养24-48小时，细胞长满70%-80%,换液，分正常组、模型组、药物血清组（在无毒性