吡格列酮对游离脂肪酸介导的βtc3细胞凋亡的干预作用论文

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1、吡格列酮对游离脂肪酸介导的βTc3细胞凋亡的干预作用论文.freelmol/L)。检测不同浓度FFA干预后βTc3细胞的增殖抑制率、细胞周期、细胞凋亡率;检测吡格列酮对FFA诱导的βTc3细胞凋亡的干预作用。结果FFA干预后的βTc3细胞增殖抑制率随FFA作用时间延长、浓度增加而进行性增加。各浓度FFA干预24h后βTc3细胞周期于G1/S检测点明显阻滞,凋亡细胞比例增加。吡格列酮干预FFA诱导的βTc3细胞后24h,βTc3细胞周期阻滞减少,凋亡细胞比例明显减少。结论FFA水平异常不利于胰岛βTc3细胞生存,并可诱导βTc3细胞凋亡;吡格列酮有助于维护

2、在FFA诱导下的胰岛βTc3细胞的生存能力,并避免或减少其凋亡。【关键词】噻唑烷二酮类脂肪酸类菲酯化胰岛糖尿病2型细胞凋亡ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatetheeffectsofpioglitazoneonFFAinducedapoptosisofβTc3cell,apancreaticβcelllineinvitro.MethodsβTc3entsmol/LFFA.TheMethodofMTTeasuretheproliferationinhibitionratesforsuccessivethreedaysafter

3、FFAintervention.Thechangesofcellcycleentbyafloetry.TUNELinetheapoptosisrateofcells24hoursaftertreatment.TUNELandfloetryineinterventioneffectofPioglitazoneontheapoptosisofβTc3cellinducedbyFFA.ResultsInhibitionofβTc3entofFFAandincreasedFFAconcentrations.Floetryanalysisshoent.Noobvi

4、ousabnormalchangeofcellcycleofβTc3cellandasubstantiallydecreaseofpercentageofapoptosiscellsafterpioglitazoneintervention.ConclusionAbnormalFFAlevelisextremelyharmfulforsurvivalofβTc3cellculturedinvitro,butpioglitazonecouldmaintainthesurvivingabilityofinsulinβTc3celldamagedbyFFA.K

5、EYI1640培养基(美国Gibco公司)培养,内含10％小牛血清、2mmol/L的L谷氨酰胺、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素;油酸、棕榈酸(美国Sigma公司);吡格列酮(江苏德源药业有限公司);甲基偶氮唑蓝(MTT,厦门泰京生物有限公司);TUNEL试剂盒(瑞士Roche公司)。1.2方法1.2.1FFA制备FFA贮备液中油酸与棕榈酸的比例为2∶1。溶解所需剂量的油酸和棕榈酸于99%乙醇10mL,振摇1h。每10mmol/LFFA加入0.4g/mLNaOH40μL,混匀,置于通风橱中过夜干燥。后加入蒸馏水10mL,加热溶液至透明皂液样

6、时,加入10%冷小牛血清40mL,混匀。经0.22μmCA过滤器过滤消毒后贮存于-20℃备用。1.2.2吡格列酮配制吡格列酮5mg用二甲亚砜(DMSO)溶解,再用DMSO溶液稀释配置成1mmol/L的母液,过滤除菌,4℃保存,使用前用RPMI1640培养基稀释,培养基中DMSO终浓度≤0.01％。1.2.3MTT法测定FFA对βTc3细胞的影响取对数生长期的βTc3细胞接种于96孔培养板,温育24h后吸去上清液,每孔加含10%小牛血清的RPMI1640培养基180μL。继续温育24h后,药物组每孔加不同浓度的FFA20μL,使其工作浓度分别为0.25,0

7、.5,1.0mmol/L,对照组加等量的含10%小牛血清的RPMI1640培养基。反应结束前4h吸去培养上清液,每孔加5mg/mL的MTT溶液50mL。继续培养4h后,吸去MTT溶液,每孔加入DMSO150μL充分溶解MTT还原产物。于酶标仪上检测490nm波长光密度值(D)。测定FFA干预后12,24,48h的细胞D值,绘制各组细胞生长曲线,取各组平均值计算细胞生长抑制率。1.2.4流式细胞仪测定βTc3细胞周期取对数生长期的βTc3细胞接种于6孔培养板,分别设置对照组、A组(FFA0.25mmol/L)、B组(FFA0.5mmol/L)、C组(FFA

8、1mmol/L)。培养细胞24h后以0.25％的胰蛋白酶充分消化细胞,500～1