植物组织培养母液的配制与保存

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1、植物组织培养母液的配制耳保存植物组织培养母液的配制与保存一、实验目的使学生熟练掌握植物组织培养屮各种成分或成分组的母液（比需要最大若干倍）的配制方法。二、实验仪器电子天平（感量为O.OOOIg）、一般天平（感量为0.1g）、烧杯100mL50mL25mL）、量筒（1000mL100mL50mL）、容量瓶200mL100mL50mL25mL）、纟田口B（500mL200mL100mL50mL）.药勺、玻棒、电炉等。三、实验试剂按培养基配方准备四、实验原理一）培养基的组成培养基是植物组织培养中的“血液”，血液的成分及其供

2、应状况直接关系到培养物的生长与分化，因此了解培养基的成分、特点及英配制至关重要。自然状态下生长的绿色植物由于自身能进行光合作用，并且能合成杭物生长发育所需的几乎所冇冇机成分，加上土壤屮含冇较全面的无机和冇机营养成分，所以只需在适当的时候施加少量的无机和有机肥（复合成分），植物就可良好的生长。目前所使用的培养基有10余种之多，大部分都是在前人研究的基础上经过分析综合和改进而成的。例如，White培养基是Uspenski和Uspenskaia（1925）的藻类培养赧演化的结果，被广泛用于根的培养；Cautheret培养基

3、是建立在Knop营养液（1865）基础上的。以后的培养基大部分是在White和Cautheret培养基的基础上改进而成。就目前所使用的各种培养基而言，可将它们的成分划分为几大类，常用的冇MS、B5、和White培养基等。1.水水是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。配制培养基母液时要用蒸憎水，以保持母液及培养基成分的精确性，防止储藏过程发密变质。大规模生产时可用自来水。但在少量研究上尽最用蒸馆水，以防成分的变化引起不良效果。2.无机营养成分：大量元素，主耍包括氮、磷、钾、钙、镁和硫六种微量元素：培养

4、基的微量元素主要包括铁（Fe）、猛（Mn）、铜（Cu）、锌（Zn）、氯（CI）、硼（B）和钳（Mo）等。这些元素有的对生命活动的某个过程十分有用，有的对蛋门质或酶的生物活性十分重要，有的是参与某些生物过程的调节。3.冇机营养成分（包括•维生素，氨基酸及其它冇机物质等）维生素：硫氨素（维生素B1）盐酸毗哆醇（维牛•素B6）和烟酸在部分培养基中还添加维生索BX（氨酰苯甲酸）、维生素C（抗坏血酸）、维生素E（生育酚）、维生素H（生物素）、维生素B12（泓钻胺酸）、维生素BC（叶酸）、维生素B2（核黄素）、泛酸钙和氯化胆碱等

5、维生素。氨基酸：廿氨酸（氨基乙酸）和肌醇（环己六醇）也是一些培养基的添加成分。其他：在某些植物或某些组织的培养川还加冇水解乳蛋白、水解酪蛋白、椰子汁、玉米胚乳、麦芽浸出物、西红柿汁和酵母浸出物等。这些可能对某些植物或植物的某些代谢过程冇重耍作用，如肌醇主耍以磷酸肌醇和磷脂酰肌醇的形式参与由Ca介导的信号转导。4.碳水化合物所有的植物组织培养娠都需要有碳水化合物作为能源,用作碳源的碳水化合物通常为蔗糖或糖，用量通常为2%-4%,高者可达5%,亦可用市售的白糖所代替，但一•般应增加用量，而且最好用比较固定的厂家生产的产品

6、，以保证实验的稳定性。5.植物生长调节物质（常称为激素）：生长素类有:NAA（蔡乙酸）、IAAJ引口朵乙酸）、IBAJ引口朵丁酸）、NOA（蔡氧乙酸），P-CPA（对氯苯氧乙酸）、2,4-D（2,4■二氯苯氧乙酸），2,4,5-T（2,4,5■三氯苯氧乙酸）等；细胞分裂素类主要有：从甜玉米未成熟种子或其他植物中分离到的玉米素［6-（4-疑基-3-甲基-反式-2丁烯氨基）瞟吟］。人工合成的细胞分裂素主要有激动素（KT,6-咲喃氨基嚓吟）、6-节某腺瞟吟（6-BA）、2IP（异戊烯姐基嚓岭）和TDZ（thidiazuro

7、n,og二瞠苯基淼）等。细胞分裂素常常与生长素相互配合，用以调节细胞分裂，细胞伸长，细胞分化和器官形成；赤雷素：主要是GA3,虽然已经用于顶端分生组织的培养和维管分化的研究，但在培养基中很少添加，因为它的作用往往是负面的；乙烯等。1.琼脂或其他支持物除液体悬浮培养外，就IT前情况而言，琼脂是一种极为理想的支持物。--般浓度0.4%-1%,质量越差的琼脂用最越大。2.其他添加剂（含天然捉取物、抗生素等）活性炭渗透调节剂抗生索抗氧化剂等二）培养基的选择选择合适的培养娠是植物组织培养成功的肚础。选择合适的培养基主要从以下两

8、个方而考虑：一是娠本培养基；二是各种激素的浓度及相对比例。MS培养基适合于大多数双子叶植物，B5和N6培养基适合与许多单子叶杭物，特别是N6培养基对禾木科杭物小麦、水稻等很冇效，White培养基适合丁•根的培养。五、实验内容与步骤一）MS大虽元素母液的配制一般将大量元素分别配制成10倍的母液，使用吋再分别稀释10倍。依次分别称取：NH4NO31