植物组织培养母液配置.doc

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1、植物组织培养母液配置一、实验目的学习配置培养基的母液，掌握配制方法，了解母液存储方法二、实验原理配置培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配置，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配置即可。三、实验器材、试剂1器材电子天平烧杯（50ml100ml500ml1000ml）量筒（1000ml100ml25ml）容量瓶（1005001000）2试剂NH4NO3,KNO3,KH2PO4,CaCl2·2H2O,MgSO4·7H2O,FeSO47H2ONa2-EDTA,MnSO4·4H2O,ZnSO

2、4·7H2O,H3BO3,KI,Na2MoO4·2H2OCuSO4·5H2O,CoCl2·6H2O,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸，蒸馏水四、实验步奏：一、母液的配置1、MS大量元素母液的配制一般将大量元素配制成10倍的母液，使用时再稀释10倍。按照配方表中用量依次分别称取扩大10倍的：NH4NO3、KNO3,KH2PO4、MgSO4.7H2O、CaCl2.2H2O的量，所有药品称取完毕后用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，最后定容至1000ml，转入1000ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期，置于冰箱中保存备用。2、MS微量元素母液的配制一般将微量

3、元素配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别依次称取：MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、H2BO3、NaMoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O扩大100倍的量，用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，用容量瓶定容至1000ml，转入1000ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期，置于冰箱中保存备用。3、MS铁盐母液配制一般将铁盐配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别称取扩大100倍的：FeSO4·7H2O和Na2·EDTA?2H2O的量，把FeSO4·7H2O和Na2·EDTA?2H2O

4、分别置于200ml蒸馏水中，加热并不断搅拌使之溶解（磁力搅拌器，边加热，边搅拌）。保持加热，把FeSO4溶液慢慢倒入Na2·EDTA溶液中并不断搅拌，接近沸腾时停止加热，待溶液冷却后加蒸馏水到最终容积1000ml，置于棕色细口瓶中，用力振荡1～2min，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期。在室温下避光保存一段时间令其充分反应后，再置于冰箱中保存备用。二、植物激素的配置常见激素：2，4－D、萘乙酸、吲哚乙酸、、6－苄氨基嘌呤（6－BA）、赤霉素（GA3）、1、生长素类：（1）生长素类：诱导细胞的分裂和根的分化，诱导愈伤组织（2）常见生长素：二氯苯氧乙酸、萘乙酸、吲哚乙酸、吲哚－

5、3－丁酸。NAA、IAA、IBA被广泛用于生根，2，4－D有利于愈伤组织的诱导和生长。（3）保存：配成一定浓度后，冰箱冷藏保存2、细胞分裂素细胞分类素：促进细胞分裂和由愈伤组织上或器官上分化不定芽。细胞分裂素常常与生长素相互配合，用以调节细胞分裂，细胞伸长，细胞分化和器官形成。（1）常用的细胞分裂素有：6－苄氨基嘌呤（6－BA）、激动素KT）、玉米素、噻二唑苯基脲（2）保存：配成一定浓度后，冰箱冷藏保存3、赤霉素（GA3）（1）保存：配成一定浓度后，冰箱冷藏保存（三、培养基的制备与灭菌（一）、培养基的制备1、将所需的各种母液和植物激素按顺序放好，将洁净的各种玻璃器皿等放在指定位置。2

6、、取烧杯一个内盛200ml蒸馏水，按照培养基配方所需量依次取母液和植物激素加入烧杯，搅拌，按相应培养基称量蔗糖和琼脂，并添加到烧杯中，在电炉上加热待琼脂完全融化后加蒸馏水定容至所需体积。3、充分混合后，用1mol/LNaOH和1mol/LHCl调节培养基的pH为培养基要求pH值。4、趁热把培养基分装到广口瓶中。封好瓶口。待灭菌。（二）、培养基的灭菌灭菌温度及灭菌时间：121℃（1.06kg/cm2）下灭菌20分钟。（如是实验所用菌材灭菌，如无菌水及器械，则是121℃（1.06kg/cm2）下灭菌30分钟）1、检查灭菌锅外层锅内水位，水量过少时应加水。把分装好的培养基放入灭菌锅的消毒桶

7、内。2、盖上锅盖，注意按照说明操作并确定已盖好，设置好温度和时间参数，开启电源加热灭菌。3、灭菌时间到后，先切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，待灭菌锅压力表指针降到0时，打开排气阀，旋松螺栓，开启锅盖，取出已灭菌的培养基。4、刚灭过菌的培养基成液体状，取出时不要用力摇动，否则会导致部分培养基沾附在瓶壁。放置在水平桌面上自然冷却。在室温下放置1-2天，观察有无微生物生长，以确定培养基是否彻底灭菌。经检查没有杂菌生长的方可使用。五、培养基凝固不好的原因1.培养