心肌细胞内游离钙的检测取petri皿进行心肌细胞培养

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1、建立离体心脏langendorff缺血再灌注损伤模型处理离体心脏.提取离体心肌组织U差速离心分离提取心肌线粒体Nycodenz密度梯度离心纯化心肌线粒体蛋白提取/2-D电泳WXLD1-T0F-MS初步,按定蛋门质研究心肌细胞内游离钙的检测取Petri皿进行心肌细胞培养，分组处理后，加入终浓度为的Fluo-3/AM,37。(2避光孵育45min,PBS液洗涤2次，采用单盲法行激光共聚焦显微镜检测细胞内游离钙的荧光强度。每组选择八个不同视野扫描细胞图像，利用分析软件选择30个细胞分析细胞内游离钙的平均荧光强度。台盼蓝染色细胞存活率检测试剂

2、盒产品编号：AR1175Lot:06I20B75规格：100次价格：80元组成：台盼蓝染色液(2X)10ml细胞稀释液100ml保存条件：4°C保存，一年有效。产品简介:作为细胞染色剂之一的台盼蓝(TrypanBlue)己被证明受到活体细胞的排斥，而死亡细胞摄入染料显示蓝色。通过常用的光学显微镜可以观察到细胞染色情况，同时可以定量计数，但是该染色无法定性区别自杀细胞还是坏死细胞。博士德生产的台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒(TypanBlueStainingCellViabilityAssayKit),是利用正常的健康细胞能够排斥台盼蓝

3、，而丧失细胞膜完整性的细胞可以被台盼蓝染色。通常认为细胞膜丧失完整性，即可认为细胞已经死亡。台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。注意事项1.本产品为100次操作2.建议待测细胞样品最好为每毫升1X106细胞浓度左右3.避免台盼蓝染色时间过长，否则由于其毒性导致细胞死亡4.本产品可直接染色生长中的贴壁细胞。5.细胞计数时乘上稀释倍数104o标准血细胞计数器(Hemocytometer)的计算方法是：1毫米方块的细胞计数X104(稀释倍数)=实际细胞数/毫升使用说明：1.收集细胞：

4、对于贴壁细胞先用胰酶和/或EDTA消化下细胞；对于悬浮细胞，则可以直接收集细胞。把收集的细胞在1000-2000g离心1分钟，弃上清；收集细胞悬液，用细胞稀释液适当稀释；或离心弃上清，估测细胞数量，向沉淀中适量加入细胞稀释液，吹打重悬细胞。1.台盼蓝染色：吸取100微升细胞悬液到EP管内，加入100微升台盼蓝染色液（2X）,轻轻吹打混匀，3-5分钟（染色时间不宜过长）后滴板计数。2.细胞存活率分析吸取适量加有台盼蓝染色液的细胞悬液，滴加血细胞计数板计数。于大方格内分别计数细胞总数和蓝染细胞数。细胞存活率=（细胞总数一蓝色细胞数）/细胞

5、总数X100%o