同型半胱氨酸诱导心肌细胞增殖并增加细胞内游离钙浓度

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1、维普资讯http://www.cqvip.com中华肾脏病杂志2003年4月第19卷第2期ChinJNephml，April2003，Voll9,No．2·慢性肾功能衰竭并发症专题论著·同型半胱氨酸诱导心肌细胞增殖并增加细胞内游离钙浓度梁敏余月明侯凡凡张训刘志强【摘要】目的探讨高同型半胱氨酸(Hey)血症对心肌细胞的作用。方法采用差速贴壁法培养SD乳鼠心肌细胞，与Hey在体外共同培养，用[，H1．胸腺嘧啶核苷([H】．TdR)掺入法测定心肌细胞DNA合成；用Lowry法检测心肌细胞蛋白质含量。Hey对心肌细胞内游离钙离子浓度([Ca2’】i)的影响采用Fura．2／A

2、M荧光染色法。结果Hey以剂量和时间依赖的方式使培养的sD乳鼠心肌细胞[H】．TdR掺入率和单个心肌细胞蛋白质含量明显增加；Hey并以剂量依赖方式增加心肌细胞[Ca2】i。结论Hey能刺激心肌细胞增殖并增加心肌细胞[Ca+】i，提示高同型半胱氨酸血症可能参与了慢性肾功能衰竭患者心肌肥厚的发生。【关键词】同型半胱氨酸；心肌；细胞；钙HomocysteineinducescardiomyocytehypertrophyandincreasesintraccllularfreecalciumconcentrationUANGMin，YUYue—ming，HOUFan-，0n

3、，ZHANGXun，LIUZhi—qiang．DivisionofNephrology,NanfangHosphal，Guangzhou510515，China【Abstract】ObjectiveToobservetheefectofhomocysteine(Hey)ongrowthofcardiomyocyteandtheconcentrationofintracellularfreecalcium([Ca2】i)ofculturedcardiacmyocyte．MethodsPrimarymyocardialceHsfromSprague—Dawleyneona

4、talrats(1to3daysold)wereisolatedandculturedwithindicatedconcentrationofHeyfordiferentduration．[H】一thymidine([H】一TdR)incorporationwasassayed，andproteinamountofmyocardialcellswasdeterminedbyLowrymethod．The[Ca】iwasquantitatedwithfluorescentdyeFura一2／AMspectrofluorometry．ResultsWhenmyocardi

5、alcellswereincubatedwithHey，increaseofincorporationof[H】．TdRwasobservedinadose．andtime．dependentmanner．Meanwhile，dose—dependentelevationof[Ca】iinmyocardialcellswasinducedbyHey．ConclusionsHeyinducesproliferationofmyocardialcellsandincreaseslevelof[Ca】i．Hyperhomocysteinemaybeimplicatedinu

6、remicmyocadialdisease．【Keywords】Homocysteine；Myocardium；Cell；Calcium心肌病变是终末期肾病(ESRD)患者常见的并用，及其对心肌细胞内游离钙离子浓度([Ca+]i)的发症和主要死亡原因¨】。近年研究表明，ESRD患者影响。普遍存在高同型半胱氨酸(Hey)血症，可能是慢性材料与方法肾功能衰竭(肾衰)患者动脉粥样硬化病变的危险一因素】。同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞有明显的、心肌细胞培养与鉴定促增殖效应】，但其对心肌细胞是否有直接作用目13d龄SD乳鼠由南方医院实验动物中心提前尚未完全阐明。本实验中，我们采用

7、培养乳鼠心供。按Simpson等描述的方法培养原代心肌细室肌细胞为模型，观察Hey对心肌细胞增殖的作胞。无菌条件下取心室肌，用0．08％胰蛋白酶0．O1％EDTA消化液分步分离消化心室肌细胞，用基金项目：国家自然科学基金(30270622)；广东省自然科学基含20％胎牛血清DMEM培养液(Sigma)，于37℃，金重点项目(013076)；全军医药卫生科研基金项目(012079)5％CO：培养箱培养90min，根据心肌细胞及非心作者单位：510515广州，第一军医大学南方医院肾内科解放肌细胞贴壁速度的不同，将心肌细胞与非心肌细胞军肾脏病研究所通讯作者