氯胺酮对谷氨酸诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞内游离钙浓度的影响.doc

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1、氯胺酮对谷氨酸诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞内游离钙浓度的影响作者：李清,朱涛,秦成名,刘菊英　[摘要]目的:观察氯胺酮对谷氨酸诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞凋亡和胞内游离钙浓度（[Ca2+]i）变化的影响。方法:取新生2~3dWistar大鼠T11~L6脊髓背角星形胶质细胞，原代纯化培养。将细胞随机分为：对照组（C组），谷氨酸组（G组），氯胺酮组(K组)，余下3组为谷氨酸+不同浓度氯胺酮组（标记为GK1~GK3组），培养30min后取各细胞检测[Ca2+]i，再培养48h检测星形胶质细胞凋亡率。结果:与C组比较，G组细胞发生了大量凋亡（P＜0.01），[Ca2+]

2、i显著升高（P＜0.01）；与G组比较，GK2组细胞凋亡率和[Ca2+]i明显降低（P＜0.05），GK3组细胞凋亡率和[Ca2+]i显著降低（P＜0.01）。结论:适量氯胺酮通过抑制细胞内钙超载显著抑制了谷氨酸诱导星形胶质细胞凋亡。　　[关键词]氯胺酮；谷氨酸；脊髓背角；星形胶质细胞；凋亡；[Ca2+]i　　Abstract：ObjectiveToobservetheeffectofketamineonGlutamate-inducedapoptosisandtheintracellulardissociatedCa2+concentration([Ca2+]

3、i)inratculturedspinalcorddorsalhornastrocytes.MethodsCellswerederivedfromT11-L6spinalcorddorsalhornof2-3daysoldWistarratandpurifiedfortwoweeks,theyweretreatedwithfollowingsixconditions:(1)shamwashwithHankssolution(controlgroup-C);(2)100μmol/LofGlutamate(group-G);(3)100μmol/Lketamine(

4、group-K);(4-6)100μmol/LofGlutamatewasaddedand30minslater,ketamineat10,50or100μmol/Lwassuperimposed,respectively(groupGK1-GK3).After30minsor48hrstreatment,the[Ca2+]iandtheapoptoticcelldeathwasanalyzedwithflowcytometer.ResultsApoptoticcelldeathandthe[Ca2+]iwassignificantlyincreasedinGr

5、oupGwhencomparedwithGroupC(P<0.01).Theapoptoticastrocytesandthe[Ca2+]iwassignificantlowinGK2group(P<0.05)andGK3group(P<0.01)thaninGroupG.Therewasnoeffectofketamineitselfat100μmol/Lonapoptoticcelldeathand[Ca2+]i.ConclusionKetamineat100μmol/Lcaninhibitglutamate-inducedapoptosi

6、scelldeathinratculturedspinalcorddorsalhornastrocytes.Itsanti-apoptoticmechanismsmaybeexplainedbyinhibitingtheintracellularCa2+overloading.　　Keywords:Ketamine;Glutamate;Spinalcorddorsalhorn;Astrocyte;Apoptosis;[Ca2+]i4　　脊髓背角的谷氨酸是初级感觉传入的主要兴奋性神经递质。外周持续性伤害刺激可使初级感觉传入神经末稍释放大量谷氨酸，激活背角星形胶质细

7、胞，通过神经元和星形胶质细胞之间的电――化学信号转导参与伤害性信号调控，导致兴奋性毒性作用，诱发星形胶质细胞损伤或凋亡[1-2]。目前对该过程中谷氨酸诱导星形胶质细胞凋亡的机制不完全清楚。氯氨酮是一种非竞争性N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂，它能通过血脑屏障与NMDA受体离子通道结合，阻断钙离子通道。有研究表明，氯胺酮可抑制脊髓星形胶质细胞的激活[3]。有关氯胺酮对谷氨酸诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞凋亡的影响尚无报道。本实验通过对大鼠脊髓背角星形胶质细胞原代纯化培养，用氯胺酮对此进行探讨。　　1材料与方法　　1.1动物、主要仪器和试剂出生1～3dWi

8、star大鼠20只，雌雄