糖皮质激素致星形胶质细胞内钙浓度的快速升高

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1、糖皮质激素致星形胶质细胞内钙浓度的快速升高作者：李茂全，王艳艳，杨书，陈朝琼，杨晓虹，余争平【关键词】应激；糖皮质激素；星形细胞；钙　　Rapidelevationofintracellularfreecalciumconcentrationinastrocytesaftertreatedbyglucocorticoid【Abstract】AIM:Toexplorethemechanismsofglucocorticoid(GC)leadingtotheelevationofintracellularfreecalciumconcentration(［Ca2+］

2、i)inastrocytesinearlyeffectphase.METHODS:AcellculturemodelofneonatalDA),MK801andBSACORT,respectively,changesof［Ca2+］iinastrocytesicroscope.RESULTS:CORTinducedrapidelevationofintracellularCa2+fluorescenceintensityin（177.1±3.8，P<0.01)paredentostthesameeffectastheCORTtreatment（200.7±

3、12.2,P<0.01).CONCLUSION:TherapideffectofGCinducessignificant［Ca2+］ielevationinastrocytesduringstress,andmaybeNMDAreceptorinvolvesinthisprocess.【Key【摘要】目的：研究应激水平的糖皮质激素（GC）在早期快速效应中对星形胶质细胞内游离Ca2+浓度（［Ca2+］i）的影响及作用机制.方法：原代培养新生DA)，受体拮抗剂5甲基二氢丙环庚烯亚胺马来酸(MK801)，牛血清白蛋白偶联CORT（BSACORT）及无细胞外钙等干

4、预组,进一步检测［Ca2+］i变化.结果：与未处理对照细胞（141.2±4.7）相比，CORT可快速介导星形胶质细胞内荧光强度增加（177.1±3.8，P<0.01)，但细胞外钙为零时无明显变化（148.5±6.3）；NMDA受体激活可使荧光强度进一步增强(195.3±7.2，P<0.01)，NMDA受体拮抗剂MK801可部分拮抗荧光强度升高(186.4±1.8)；BSACORT可产生与CORT类似的效应（200.7±12.2，P<0.01).结论：应激水平的GC在早期可快速增加星形胶质细胞胞内［Ca2+］i，激活NMDA受体是其中的重要机制之

5、一.【关键词】应激；糖皮质激素；星形细胞；钙星形胶质细胞作为中枢神经系统（centralnervoussystem,S）内数量最多的细胞，广泛参与S内信息的处理与传导，并在神经退行性疾病、脑老化及外伤、炎症等病变的发生发展中扮演重要角色［1］.糖皮质激素（glucocorticoid，GC）发挥作用可通过早期（30min以内）的非基因组效应和后期的基因组效应［2］.有2结果2.1原代星形胶质细胞的纯度鉴定体外原代培养星形胶质细胞，在显微镜下呈单层生长，互不重叠.采用间接免疫荧光法检测星形胶质细胞的特征性抗原GFAP，结果显示表达阳性率>95%.提示所分离的

6、星形胶质细胞纯度高（图1）.图1间接免疫荧光法鉴定培养的海马星形胶质细胞纯度×2002.2CORT处理星形胶质细胞引起细胞内钙的动态变化荧光指示剂Fluo3与游离钙结合后，在激光共聚焦显微镜下可见处理前星形胶质细胞内较低的荧光强度（141.2±4.7），加入1μmol/LCORT处理10min星形胶质细胞内荧光强度有显著增强（177.1±3.8，P<0.01，图2）.但外钙为零时，荧光强度无明显变化（148.5±6.3），差异无统计学意义.说明CORT诱导星形胶质细胞内钙升高是以外钙内流为主而非内钙释放（图3）.2.3CORT处理星形胶质细胞及NMDA，M

7、K801A:未处理对照组;B:1μmol/LCORT处理10min组.2.4BSACORT处理星形胶质细胞引起细胞内钙的变化结果显示，加入1μmol/LBSACORT处理星形胶质细胞，细胞内荧光强度明显增强（200.7±12.2），影响具有显著性（P<0.01，图5).3讨论星形胶质细胞在S内的代谢、营养、支持、调节突触等活动中发挥重要作用.GC的急性升高一方面可能通过快速效应直接损伤神经元的功能；另一方面，GC对星形胶质细胞的快速作用间接损伤神经元的功能.本实验选择星形胶质细胞的内钙变化作为效应指标，观察其动态变化的过程.由于星形胶质细胞的A:未处理对照

8、组;B:1μmol/LB