糖皮质激素致星形胶质细胞内钙浓度的快速升高论文

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1、糖皮质激素致星形胶质细胞内钙浓度的快速升高论文李茂全，王艳艳，杨书，陈朝琼，杨晓虹，余争平【关键词】应激；糖皮质激素；星形细胞；钙Rapidelevationofintracellularfreecalciumconcentrationinastrocytesaftertreatedbyglucocorticoid【Abstract】AIM:Toexplorethemechanismsofglucocorticoid(GC)leadingtotheelevationofintracellularfreecalciumconcentrati

2、on(［Ca2+］i)inastrocytesinearlyeffectphase.METHODS:AcellculturemodelofneonatalDA),MK801andBSACORT,respectively,changesof［Ca2+］iinastrocytesicroscope.RESULTS:CORTinducedrapidelevationofintracellularCa2+fluorescenceintensityin（177.1±3.8，P0.01)paredentostthesameeffectastheCOR

3、Ttreatment（200.7±12.2,P0.01).CONCLUSION:TherapideffectofGCinducessignificant［Ca2+］ielevationinastrocytesduringstress,andmaybeNMDAreceptorinvolvesinthisprocess.【Key【摘要】目的：研究应激水平的糖皮质激素（GC）在早期快速效应中对星形胶质细胞内游离Ca2+浓度（［Ca2+］i）的影响及作用机制.方法：原代培养新生DA)，受体拮抗剂5甲基二氢丙环庚烯亚胺马来酸(MK801)，牛血清白

4、蛋白偶联CORT（BSACORT）及无细胞外钙等干预组,进一步检测［Ca2+］i变化.结果：与未处理对照细胞（141.2±4.7）相比，CORT可快速介导星形胶质细胞内荧光强度增加（177.1±3.8，P0.01)，但细胞外钙为零时无明显变化（148.5±6.3）；NMDA受体激活可使荧光强度进一步增强(195.3±7.2，P0.01)，NMDA受体拮抗剂MK801可部分拮抗荧光强度升高(186.4±1.8)；BSACORT可产生与CORT类似的效应（200.7±12.2，P0.01).结论：应激水平的GC在早期可快速增加星形胶质细胞胞内

5、［Ca2+］i，激活NMDA受体是其中的重要机制之一.【关键词】应激；糖皮质激素；星形细胞；钙星形胶质细胞作为中枢神经系统（centralnervoussystem,S）内数量最多的细胞，广泛参与S内信息的处理与传导，并在神经退行性疾病、脑老化及外伤、炎症等病变的发生发展中扮演重要角色［1］.糖皮质激素（glucocorticoid，GC）发挥作用可通过早期（30min以内）的非基因组效应和后期的基因组效应［2］.有文献报道，GC的基因组效应可增加星形胶质细胞胞内游离Ca2+浓度（［Ca2+］i［3］，Ca2+作为重要的胞内信使，对细胞功

6、能、信号传递及神经递质释放具有重要意义.目前关于应激时GC对星形胶质细胞的作用机理，尤其是GC的非基因组效应对星形胶质细胞［Ca2+］i的影响少见报道.本实验选用应激浓度的皮质酮(corticosterone,CORT)，应用激光共聚焦显微镜观察星形胶质细胞内早期Ca2+水平的变化，初步探讨应激情况下GC非基因组作用阶段对Ca2+的影响及机制.1材料和方法1.1材料出生2d以内的新生近交系DM培养基(美国Gibco公司)；胎牛血清(天津TBD公司）；胰蛋白酶和EDTA(美国Amresco公司)；生物素标记抗大鼠胶质纤维酸性蛋白(glial

7、fibrillaryacidprotein,GFAP)mAb(北京中山生物技术公司）；藻红蛋白(Phycoerythrin,PE)标记链霉亲和素（美国eBioscience公司）；CORT，N甲基D天冬氨酸(NmethylDaspartate,.freela公司)；Fluo3/AM和pluronicF127(美国MolecularProbes公司)；XTL3A型解剖显微镜（江苏镇江电子仪器厂）；DMIRB型荧光显微镜和TCSNT激光共聚焦显微镜(德国Leica公司).1.2方法1.2.1大鼠星形胶质细胞的原代培养及鉴定无菌条件下取出大鼠双

8、侧海马，置于4℃的0.01mol/LPBS缓冲液中，在解剖显微镜下剥除脑膜及血管，剪碎后用2.5g/L的胰酶和等体积1mmol/L的EDTA在37℃消化20min，终止消化后吸管吹打，100目