川芎嗪对长波紫外线诱导人皮肤成纤细胞衰老的拮抗作用及其机制研究

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1、分类号Ｒ７巧．１学校代号１０５巧ＵＤＣ６１０密级学号．２０１２１１２６７６４ＧｕａｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ硕：ｔ学位论义川夸嗦对长波紫外线诱导人皮肤成纤细胞衰老的掠抗作用及其机制研究学位申请乂赵巧玲指导教师姓名刘仲荣专业名称皮肤病与巧病学申请学位类型科学学位论文提交日期２０１５年５月广州中医药大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，独立进行研究工，是个人在导师的指导下作所取得的成果。除文中己经特别加Ｗ注明引用的内容外，本论文不含任何

2、其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中Ｗ明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名夏ｋ秦日期：年月日ｒ少每！巧关于学位论文使用授权的声明本人完全了解广州中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部口机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阔和借阅。本人授权广州中＞１医药大学可＾将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可！＾采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名论

3、巧师签名Ｉ曰期：＞年ｒ月曰ｊ佑气摘要目的：本研巧旨在通过观察人皮肤成纤维细胞（化ｍａｎＤｅｒｍｉｓＦ化的ｂｌａｓｔｓ，ＨＤＦ）的－Ｒｅａｃｔ体外増殖活性、Ｐ半乳糖昔酶染色阳性率、细胞内活性氧类总量（ｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｅｃＲＯＳ－－ｐｉｅｓ）、３Ｐ１、ＭＭＰ３，探讨川写嗦对长波紫外线，ｐ５蛋白及ＭＭ的ｍＲＮＡ表达等（ＵｔｒａｖｉｏｌｅｔＡ，ＵＶＡ）反复照射诱导人皮肤成纤维细胞衰老的可能作用及其机制，一为其进步成为光防护成分并应用于光保护剂提供理论依据。方法：；采用酶消化法从人包皮组织中分离培养成纤维细胞第１部分，对分离培养

4、的细胞进行形态学鉴定，并选择合适的传代细胞进行实验；低剂量ＵＶＡ反复照射人皮肤成Ｋ－纤维细胞，连续照射５天０Ｊ，采用ＣＣ８，每天１法检测细胞增殖活性、染色法估算－半郭糖昔酶表达量Ｐ，探讨反复ＵＶＡ福射对人皮肤成纤维细胞的作用。第２部分：采用不同浓度的川写嗦预处理人皮肤成绅维细胞后进行反复低剂量ＵＶＡ照射，连续照射５天，每天１０Ｊ，光学显微镜下观察照射前后细胞形态的变化、ＣＣＫ－８法检测细胞増殖活性－、ｅ半乳糖昔酶染色，探讨川夸嗦对反复ＵＶＡ福射诱导人皮肤成纤维细胞衰老的括抗作用，并采用流式细胞术检测细胞内Ｒ０Ｓ总量、ＷｅｓｔｅｒｎｂＰＣＲＭＰ－－

5、ｌｏｔ检测ｐ５３蛋白表达、实时英光定量法检测Ｍ１、ＭＭＰ３的ｍＲＮＡ表达，探讨川夸嗦抗皮肤衰老的可能作用机制。结果：第１部分：原代培养细胞光镜下见细胞的形态从圆形、透亮逐渐伸展呈典型的梭＇形，，交织成网狀，并逐渐汇合成鱼群状细胞生长快速、纯度较高，，状态良好符合？？为人皮肤成纤维细胞的生长形态。细胞生长潜伏期为０Ｉｄ２日，，生长期为天平台期为６？７ｄＵＶＡ照射人皮肤成纤维细胞可诱导－；反复其出现増殖缓慢、ｅ半到ＪＩ昔酶染色阳性率増加等老化现象。第２部分：川写嗦对正常人皮肤成纤维细胞的体外增殖活性无明思促进或抑制作用，ＵＶＡ照射后人皮肤成纤维细胞

6、的体外增殖活性有明显促进作用但对经反复，并能一降低其目－半乳糖昔酶染色阳性率，旦具有定的剂量依赖性，与ＵＶＡ组的差异比较均有统计学意义（八化０５）。同时还发现川号嗦能降低反复ＵＶＡ照射诱导的人皮肤成纤维细胞内Ｒ０Ｓ总量升高，Ｗ浓度为５〇Ｐｇ／ｍｌ、ｌＯＯｕｇ／ｍｌ时明愚，此两组细胞Ｒ０Ｓ值能降低至接近假照射姐，与ＵＶＡ沮比较有均统计学差异（戶均＜０．０５）；ＵＶＡ反复照射后人皮肤成纤维细胞内ｐ５３蛋白表达増加，与假照射组的差异比较有统计学意义／ｍ０５，ＶＡＵＶＡ组比较＋（）而川夸嗦能降低Ｕ反复照射诱导的的３蛋白表么与，ＵＶＡ川夸嗦１００Ｕｇ／ｍ

7、ｌ和假照射组的ｐ５３蛋白表达量差异有统计学意义（尸均〈０．０５），同Ｉ时各川夸嗦浓度组的ｐ５３蛋白表达随着药物浓度的増加呈下降趋势。反复ＵＶＡ照射人ＭＰ－１－３ｍＲＮＡ皮肤成纤维细胞可诱导其Ｍ、ＭＭＰ的表达增加，与假照射姐的差异比较均一－－有统计学意义（戶均〈０．０５），而川夸嗦在定浓度范围内能降低ＭＭＰ１、ＭＭＰ３的ｍＲＮＡ表达，与ＵＶＡ组的差异比较均有统计学意义（戶均〈０．０５）。结论：川写嗦对低剂量ＵＶＡ反复照射诱导人皮肤成纤维细胞衰老具有措