枸杞叶含药血清对长波紫外线损伤人皮肤成纤维细胞的保护作用

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1、枸杞叶含药血清对长波紫外线损伤人皮肤成纤维细胞的保护作用：徐静,穆静,徐武清,刘雅妮,王文平【摘要】目的探讨不同浓度枸杞叶（LBL）含药血清对长波紫外线（UVA）辐射致人真皮成纤维细胞（HSF）损伤的防护作用及其作用机制。方法采用强度2.8J·cm-2的UVA照射HSF损伤造模，实验分为空白组、对照组、UVA模型组、空白血清组、UVA+0.15g·mL-1LBL组，UVA+1.5g·mL-1LBL组和VitC阳性对照组，用MTT法检测细胞增殖活性，酶生化法检测MDA含量及培养液中LDH漏出量。结果正常大鼠血清不影响HSF功能，UVA照射HSF损伤法可造成HSF增殖活性降低，MD

2、A含量升高，LDH漏出增加，与空白组相比差异有统计学意义(P均＜0.05)；不同浓度的LBL及VitC均能增加细胞的增殖活性，减少MDA含量和LDH的漏出量，但LBL作用更优(P＜0.05)。结论不同浓度LBL对UVA损伤的HSF均有一定的保护作用，其机制可能与LBL的抗氧化作用及促进细胞增殖活性有关。【关键词】枸杞叶；长波紫外线；人皮肤成纤维细胞；抗氧化；细胞增殖　　Abstract:ObjectiveToexploretheprotectiveeffectsandmechanismofthedifferentconcentrationsoflyciumbarbarumlea

3、f(LBL)containingserumonhumanskinfibroblast(HSF)invitroirradiatedbyultravioletA(UVA).MethodsHSFmodel-2ofUVAdamage.Experimentgroup,teasuredbyMTTmethods.ThecontentsofMDAandtheactivitiesofLDHinthesupernatantsoffibroblastsinedbybiochemicalmethods.ResultsNormalratserumdidnotaffectthefunctionofHSF.

4、Thatthefibroblastsechanismofthiseffectmaybeassociatedbarbarumleaf;ultravioletA;Humanskinfibroblast;antioxidant;cellproliferation　　宁夏枸杞在《回回药方》中称之为忽咱则。枸杞叶（Lyciumbarbarumleaf，LBL）是茄科植物枸杞的树叶，其药用价值历代文献均有记载。甄权在《药性本草》中说：“用枸杞叶作饮代茶，能止渴、清烦热、益阳事。”唐刘禹锡《传信方》以枸杞叶煮粥，治疗劳损，《本草纲目》称枸杞叶有“除烦益志，补五劳七伤，壮心气，除热毒，散疮肿，

5、除风明目”之功效。本研究采用体外培养人真皮成纤维细胞（umanskinfibroblast，HSF）建立长波紫外线（ultravioletA，UVA）损伤模型，观察LBL对细胞损伤的保护作用。　　1研究方法　　1.1LBL含药血清制备　　1.1.1LBL水提药液制备　　实验所用枸杞叶140g，全部一次性购于宁夏银川市国大药房（于宁夏中宁地区）。将LBL置于砂锅内，加相当于药材量10倍的纯净凉水浸泡1～2min，煮沸30min，滤过；药渣加3～6倍量水继续煎煮，煮沸15～20min，滤过。合并2次煎出液，于水浴上浓缩至每1mL相当于药材量1～2g的药液。　　1.1.2含药血清制备

6、　　选用雄性SD大鼠20只（由宁夏医科大学实验动物中心提供），体重300g左右，常规饲养1周后，随机分为4组：LBL高剂量组、LBL低剂量组、维生素Ｃ（VitC）对照组和空白对照组，每组5只。LBL高剂量组灌入1.5g·mL-1高浓度LBL水提药液，LBL低剂量组灌入0.15g·mL-1低浓度LBL水提药液，VitC对照组灌入0.1%VitC溶液，空白对照组灌入0.9%生理盐水。4组大鼠每次灌胃药量均为1mL·100g-1体重，每日2次，连续灌胃3d。第3天末次给药1h后，按照通法采血，3000r·min-1，10～15min，分离血清，55℃，30min灭活后，按不同组别大鼠

7、制成4种血清。其中LBL高、低剂量组，VitC对照组大鼠血清统称含药血清，生理盐水空白对照组大鼠血清称为空白血清。最后用各组含药血清和空白血清分别配置含20%血清的DMEM完全培养液（加双抗），分装置低温冰箱备用。　　1.2UVA照射法致HSF损伤模型　　1.2.1细胞培养及分组处理　　取自无菌状态下“包皮环切术”所切除的正常皮肤，要求供皮者为健康成年男性。将所取皮肤置于75%的乙醇中漂洗数次，迅速浸入含有低浓度双抗的PBS中30min以上，剪成0.2cm×0.5cm大小，置于培养皿中，加入