尿道下裂差异表达mirna的筛选研究

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1、SOOCHOWUNIVERSITY硕士专业学位论文论文题目尿道下裂差异表达miRNA的蹄选研究研究生姓名陈娇指导教师姓名周云专业名称儿科学研究方向泌尿外科论文提交日期20.15年4月23尿道下裂差异表达miRNA的筛选研究中文摘要尿道下裂差异表达miRNA的筛选研究中文摘要目的本研究通过筛选尿道下裂包皮组织中差异表达的miRNA，探讨miRNA及其靶基因和信号通路在尿道下裂的发病机制中的作用，寻找尿道下裂预防和治疗的新靶点。方法收集9例尿道下裂患儿及3例包茎患儿的包皮组织作为研究对象，其中3例尿

2、道下裂患儿术前接受过HCG治疗。分别在组织中抽提总RNA，对总RNA进行质量检测，利用丹麦Exiqon公司研制的芯片筛选差异性表达的miRNA，同时采用RT-PCR方法对芯片结果进行验证。进一步结合生物信息学方法对miRNA的靶基因进行预测，并应用DAVID数据库进行靶基因功能富集分析和信号转导通路富集分析。探讨总结与尿道下裂发病、治疗和预后相关的miRNA及其调控机制。结果1.miRNA芯片技术筛选结果：选择差异倍数两倍以上、P值<0.05的差异表达miRNA进行聚类分析。与包茎患儿比较，尿道

3、下裂患儿包皮组织中表达上调的miRNA共19个，表达下调的miRNA共15个。对尿道下裂患儿术前是否应用HCG治疗也做了对比分析，术前应用药物较未应用药物患儿包皮组织中表达上调的miRNA共25个，表达下调的miRNA共19个。进一步对所有包皮组织差异表达miRNA进行综合分析发现部分miRNA形成在尿道下裂组低表达，而在包茎和尿道下裂术前应用药物治疗组高表达。2.RT-PCR验证结果：选择差异表达的10个miRNA进行RT-PCR验证，其中5个miRNA得到验证，其差异表达趋势与芯片结果相符，

4、分别为let-7b-3p、miR-145-5p、miR-376a-3p、miR-377-3p、miR-1-3p。3.生物信息学结果：let-7b-3p、miR-145-5p、miR-376a-3p、miR-377-3p、miR-1-3pI中文摘要尿道下裂差异表达miRNA的筛选研究可能与尿道下裂发病相关，靶基因为SOX9、FGF14、FGFR2、TCF7L2、ZEB2、PAX3、SOD1、ZFPM2、THBS1、PAX6、SMAD4、DMRT2等，其功能与胚胎发育、腺体发育、性别分化和伤口愈合等

5、相关，相关信号通路为MAPK信号通路、TGFβ信号通路、Wnt信号通路、钙信号转导通路和前列腺癌相关信号通路等。结论1.首次建立尿道下裂miRNA基因表达谱，筛选出差异表达的miRNA，在尿道下裂与包茎、术前是否用药物治疗的尿道下裂间获得差异表达miRNA，并推测miRNA表达趋势。2.通过构建特异性茎环RT引物，采用实时定量PCR技术，验证了10个差异表达miRNA，其中5个miRNA的RT-PCR结果与基因芯片结果相符。3.预测5个miRNA的靶基因，并进行靶基因功能分析，总结与尿道下裂相关

6、的miRNA及其作用机制。关键词：尿道下裂，miRNA，基因芯片，RT-PCR作者：陈娇指导教师：周云IIScreeningofdifferentlyexpressedmicroRNAsinHypospadiasAbstractScreeningofdifferentlyexpressedmicroRNAsinHypospadiasAbstractObjectiveThisstudywastryingtofindoutthosedifferenceexpressionofmiRNAsthatmi

7、ghtberelatedtohypospadiasbyscreeninginhypospadiasforeskintissue,andtheroleofthedifferentiallyexpressedmiRNAsandtheirtargetgenesandsignalingpathwaysinthepathogenesisofhypospadias,whichcanmakeafurthernewtargetofpreventionandtreatment.MethodsTheforeskin

8、tissueof9casesofchildrenwithhypospadiasand3casesofchildrenwithphimosiswasseparatelycollectedastheprimaryobjectsofthisstudy,and3casesofhypospadiasweretreatedbyHCGbeforetheoperation,fromwhichtotalRNAwasextracted,followedbytestingthequalityoftotalRNA.Th