pft-α联合bmp-2诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的研究

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1、授予单位代码10089学号或申请号13016HebeiMedicalUniversity硕士学位论文在职科学学位PFT-a联合BMP-2诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的研究学位申请人：陈惠刚导师：张雷教授王海萍教授专业：人体解剖与组织胚胎学二级学院：基础医学院2015年3月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属杀诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果,其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文

2、主要内容相关的论文,第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则,承担相应法律责任。研究生签名:f4i科!导师签章：学院领导盖章：河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写,文责自负。研究生签名导师签章:年f月”^曰目录中文摘要……………………………………………………………………1英文摘要………

3、……………………………………………………………3英文缩写……………………………………………………………………6研究论文PFT-α联合BMP-2诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的研究前言……………………………………………………………………7材料与方法……………………………………………………………8结果……………………………………………………………………15附图……………………………………………………………………17附表……………………………………………………………………24讨论…………………………………

4、…………………………………26结论……………………………………………………………………28参考文献………………………………………………………………29综述骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞研究进展····················32致谢…………………………………………………………………………47个人简历……………………………………………………………………48中文摘要PFT-α联合BMP-2诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的研究摘要目的：目前，缺血性心脏病在我国甚至全球的发病率越来越高，对人类健康

5、的影响也越来越严重，针对此类疾病的传统治疗方法只能缓解病情，而不能从根本上修复梗死或丢失的细胞；由干细胞分化成心肌细胞来治疗缺血性心脏病可以促进细胞修复及血管再生，近年来通过细胞移植治疗心血管疾病已受到国内外专家学者的高度重视。骨髓间充质干细胞（BMSCs）具有自我更新的能力，可以分化为多种细胞，包括心肌细胞，而且具备不涉及伦理争议、易于取材及分离培养、低免疫原性等优点，成为了细胞移植治疗缺血性心脏病的“种子细胞”，但由于BMSCs数量非常稀少，而且随着年龄的增加此类细胞数量在逐渐减少，为了保证治疗效果，大量

6、扩增纯化及提高BMSCs的转化率是十分必要的。目前在诱导剂的单独使用方面已经有大量实验成果，本实验将在此基础上探究PFT-α（P53基因抑制剂）与BMP2（BoneMorphogeneticProtein2,骨形态发生蛋白-2）分别及联合诱导BMSCs向心肌细胞分化的效果，为细胞移植治疗缺血性心脏病提供可借鉴性参考依据。方法：1BMSCs诱导分化：取健康SD大鼠四肢长骨，将骨髓中的BMSCs利用离心贴壁法分离出，并纯化，培养于的IMDM培养液（含10%胎牛血清）中，每隔3d换液，选生长良好的第2代BMSCs分

7、别以含PFT-α20μmol/L、BMP-20.2ng/ml和加入联合PFT-α20μmol/L及BMP-20.2ng/ml的IMDM培养液分组诱导，同时以不加任何诱导剂的培养基的培养组作为对照组，诱导4天后将含有诱导液的培养基除去，加入新培养基（不含诱导液）中继续培养4w。2免疫细胞化学染色：取各实验组以及空白对照组诱导4周的细胞，在化学染色光镜下观察细胞中α-actin（α-横纹肌肌动蛋白）、desmin（结蛋白）、cTnT（心肌特异性肌钙蛋白）和cTnI（肌钙蛋白-I）阳性细胞的表达情况。1中文摘要3免

8、疫荧光双标染色技术：取PFT-α联合BMP-2诱导组培养4周的细胞进行爬片，运用免疫荧光染色法对细胞α-actin、cTnT蛋白进行荧光标记，观察α-actin、cTnT的共表达情况。4透射电镜观察：将PFT-α联合BMP-2诱导4周的细胞通过离心、脱水等处理制成切片，用透射电镜观察其内部结构。结果：1BMSCs培养：通过运用离心法与贴壁分离筛选法分离培养的BMSCs细胞接种24h后贴壁逐渐增多，类