bmp-2诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化实验的研究

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1、BMP．2诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的实验研究中文摘要BMP．2诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的实验研究中文摘要目的：冠心病在发达国家的发病率和死亡率都居于第一位，通常认为心肌细胞在出生后即不能再生，心肌细胞死亡后大量的心肌细胞由疤痕组织替代，导致局部的心肌收缩紊乱，心功能下降，最后导致充血性心衰。本试验针对心衰的基本病理生理，通过BMP．2诱导后的骨髓间充质干细胞移植入受损的心肌内，改善心室重构，促进梗死区血管新生来增加干细胞修复受损心肌的治疗效果，并进一步探讨干细胞治疗缺血性心肌病的机理。方法：从健康梅山猪

2、骨髓中分离培养BMSCs，取第四代骨髓间充质干细胞，用BMP．2诱导24dx时，促进其向心肌细胞定向分化，免疫细胞化学检测诱导后不同时间点的心肌特异性蛋白cTnT和CX．43及MHC的表达。健康雄性梅山猪15只随机分为3组，经心导管用明胶海绵栓塞LAD第二对角支建立心梗模型，A组(对照组)：梗死四周后通过介入方法在心梗区移植5mlDMEM；B组(干细胞组)：梗死四周后在心梗区移植1x107个BMSCs；C组(诱导组)：梗死四周后在心梗区移植1x107个经BMP．2诱导分化后的BMSCs。检测心梗前后及移植后心功能的变化，Ⅷ

3、因子免疫组化染色计数新生毛细血管数量，Westernblot检测各组梗死区GATA．4蛋白表达，ECT检测心肌缺血状况，大体标本TTC法检查各组心梗面积的变化。结果：利用Ficoll分离和贴壁培养的方法可以获取稳定分裂的梅山猪骨髓间充质干细胞。用BMP．2诱导后，MCSs的形态和排列发生变化。免疫细胞化学染色显示，cTnT和CX．43从诱导后3周开始表达，4周cTnT表达增强，呈现密集的横纹样结构；CX．43在3周位于细胞膜下，4周呈颗粒状密集分布于肌管的相邻细胞连接处；三周后可见MHC阳性棕黄颗粒表达于胞浆及胞核中。移植

4、前，血流动力学LVDP、士dp／dtm戤下降明显(与心梗前比较，P<0．05)，移植后，随着时间的延长，B、C组的心功能较移植前有明显改善(尸<0．05)，而C组的改善更为明显(与B组比较，P<0．05)；与A、BIBMP．2诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的实验研究中文摘要两组，C组的心梗面积缩小，新生毛细血管数量增多(P<0．05)；Westernblot检Nc组GATA．4蛋白表达明显升高(与A，B组比较，P<0．05)：ECT同时显示诱导组心肌缺血状况改善明显。结论：BMP．2可以在体外诱导MSCs分化为心肌样细

5、胞并表达心肌特异性蛋白，诱导后的骨髓间充质干细胞可以在梗死心肌内存活、增殖并分化，移植经BMP．2诱导后MSCs较移植未经诱导的MSCs能更好促进毛细血管的再生，改善心肌缺血状态，从而更好的改善心功能。关键词：骨髓间充质干细胞骨形态发生蛋白．2心肌分化II作者：指导老师：丁以国沈振亚教授BMP-2诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的实验研究英文摘要EmpiricalstudyofboneMesenchymalStemCells⋯一rentiatiqint,cardiaccellsinduced’BdiIIerentiati

6、onintocardiaccellsinducedbyMP．2jⅥ上，一=乙Abstractobjective：Coronaryheartdiseaseremainsthefirstcauseofmorbidityandmortalityworldwide．ItisknownthatCardiomyocytesCannotregenerateafterbirth．Lossofcardiomyocytesleadstoregionalcontractiledysfunctionandnecrosis．cardiomyocyt

7、esininfarctedventficulartissuesareprogressivelyreplacedbyfibroblastsandformSCartissues，whichleadsthecontractilefunctiondisorderandheartfunctiondecrease，theninducescongestiveheartfailure．Thisexperimentwillaimedtoimprovetheheartfunction，amendmentcardiomyocytesrecons

8、titution，increasecellnumberandpromoteneogenesisbloodvesselthroughtransplantingMesenchymalStemCelltreatedbyBMP一2．Methods：111ebonemarrowstemcellsweretaken