二甲基亚砜诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的实验研究

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1、分类号：单位代码：10092密级：学号：20102003二甲基亚砜诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的实验研究单位：专业：研究生姓名：导师姓名及职称：河北北方学院基础医学院人体解剖与组织胚胎学孙龙云张辉教授研究起止日期：2012．4．2013．4提交日期：2013．5涮眦方学院√幽幽学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北北方学院所有。河北北方学院有权对本学位论文进行交流、公开和使用。导师签研究生签名：叮d、云泼pI)年寸月岁一日河北北方学院研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指

2、导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。导师签名研究生签名：羽、侧乏沙f；年t月岁勺日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·4英文缩写⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·7研究论文二甲基亚砜诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的实验研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8月U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·9结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·16附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l8附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·23结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28综述骨髓间充质干细胞诱导分化为心肌样细胞的鉴定指标⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32致{射⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··41个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42中文摘要二甲基亚砜诱导骨髓间充质千细胞向心肌细胞分化的实验研究摘要近年来随着经济的发展，物质生活水平的提高及饮食结构的改变，以心肌梗死为代表的心血管系统疾病在我国的发病率呈上升趋势。由于心肌细胞是终末分化细胞，心肌梗死后，存活的心肌细胞数目大量减少，心肌组织由纤维结缔组织代替，瘢痕逐渐形成，导致心功能下降。目前针对心肌梗死等心血管疾病的治疗方法有药物治疗、介入治疗、外科血运重建、激光治疗等。但这些治疗措施均不能从根本上挽救濒死的心肌组织。因此，近年来，通过细胞移植治疗心血管疾病已成为研究的热点之

5、一。而选择恰当的用于移植的“种子”细胞则是决定移植治疗心血管疾病成功与否的关键。骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcells，BMSCs)是存在于骨髓中除造血干细胞之外的另外一种干细胞，其具有分布广泛、取材方便、易分离扩增、低免疫源性、易被外源基因转染等优点，已成为治疗心血管系统疾病极有前景的种子细胞。大量研究证明，BMSCs在一定的诱导条件下可定向分化为心肌细胞。二甲基亚砜(dimethylsulfoxide，DMSO)是目前常用的诱导分化剂之一，其作用机制主要是通过抑Nc—MYC基因表达，从而降低细胞内源性聚腺昔二磷酸核苷水平。本实验通过

6、体外分离培养SD大鼠的BMSCs，并用二甲基亚砜诱导使其定向分化为心肌细胞，对分化过程进行细胞形态学、心肌特异基因及转录因子表达加以分析研究，以探讨DMSO诱导BMSCs定向分化为心肌细胞的可行性及最佳诱导浓度，为BMSCs临床修复受损心肌组织的应用提供理论依据。1BMSCs的诱导分化：利用全骨髓贴壁分离培养法自3周龄SD大鼠四肢长骨骨髓中分离纯化BMSCs，由含10％胎牛血清、双抗(青霉素100mg／L，链霉素1009／L)组成的IMDM完全培养基在37℃、5％C02条件下进行培养。接种后12h半量换液，24h完全更换培养基，此后每隔2d换液。选生长良好的第2代BMSCs分

7、别加入含DMSO(O．6％、O．8％、1．O％)的中文摘要IMDM培养基分组诱导，依次为A、B、C组，不加诱导剂为空白对照组(D组)，3d后去除诱导培养基，之后各组均加入不含DMSO的IMDM培养基继续培养4周。2免疫细胞化学染色：取各组诱导后第28d的细胞，行免疫细胞化学染色技术并观察分化细胞中结蛋白(desmin)、0【．横纹肌肌动蛋白(0【一actin)、P38MAPK、心肌肌钙蛋t刍T(cTnT)和心肌肌钙蛋白I(cTnI)的表达情况。3免疫荧光双标染色技术：取浓度1．O％DMSO的诱导组培养第