galectin-1和mgl对jurkat细胞凋亡的协同作用及其机制研究

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1、、，•..…：广^：:研究生学号：2^2102148密级：无.jmGalectin-l和MGL对Jurkat细胞_亡的协爛作用及其机翻赛其p»".：-.^!^«、：：”.；/、：/-.:户人,,产•y：…“‘二、•一.、、$、、’-“.StudyonsynergisticeffectandmechanismsofGalectin-1andMGL-mediatedJuxicatcellapoptosis作者:王健辉指导教师魏民教授^级学生物学二级学科：细胞生物学研究方向:细胞免疫学，位类型；学历硕士东北师范大学学位评定委员会2015年6月^-.‘麟，：I‘」遞綱摘要诱导T细胞凋亡

2、、降低机体的细胞免疫能力是肿瘤细胞免疫逃逸的重要机制之一。有研究表明，某些肿瘤细胞分泌的半乳凝素-1（Galectin-1，Gal-1），可以诱导T细胞凋亡。另外，表达于肿瘤微环境中的未成熟树突细胞（immaturedentriticcells,iDC）以及耐受性树突细胞（tolerogenicdentriticcell,tDC）表面的巨噬细胞半乳糖型凝集素（macrophagegalactose-typelectin，MGL）亦可诱导T细胞凋亡。但Gal-1和MGL是通过何种信号途径诱导T细胞凋亡以及Gal-1和MGL是否能够协同诱导T细胞凋亡并不清楚。在本研究中，我们首先构

3、建了Gal-1原核表达载体，并在体外诱导表达纯化得到Gal-1蛋白，其次分别对Gal-1和MGL诱导T细胞凋亡的信号途径进行了初步探究，最后研究了二者是否能够协同诱导T细胞的凋亡。在本研究中，Jurkat细胞系被作为体外测试的T细胞模型。为获得实验所需的Gal-1蛋白，我们构建了Gal-1原核表达载体，通过PCR验证、双酶切验证和测序验证结果表明，原核表达载体构建成功。通过对大肠杆菌BL21原核表达条件的优化，我们最终成功获得了可用于后续实验的能与Jurkat细胞结合的可溶性Gal-1蛋白。在Gal-1诱导T细胞凋亡的实验中，我们首先验证了四种白血病细胞系THP-1、U937、

4、KG1、K562均可分泌Gal-1蛋白。其次，我们将Gal-1蛋白与T细胞共孵育，并通过FACS检测表明，Gal-1可以有效诱导T细胞凋亡。在随后的Westernblot和免疫荧光实验中我们发现，Gal-1是通过caspase非依赖且AIF非依赖的途径诱导T细胞凋亡。在MGL诱导T细胞凋亡的实验中，我们首先验证了iDC可以特异性地表达MGL。其次，我们将MGL蛋白与T细胞共孵育，并通过FACS检测表明，MGL亦可有效诱导T细胞凋亡。接下来的Westernblot和免疫荧光实验表明，MGL是通过caspase非依赖的AIF入核的途径诱导T细胞凋亡。上述研究表明，Gal-1和MGL

5、是通过不同的途径诱导T细胞凋亡。因此我们推测，Gal-1和MGL应该具有协同诱导T细胞凋亡的作用。我们将Gal-1和MGL蛋白与T细胞共孵育，经FACS检测证实，二者确实可以协同诱导T细胞的凋亡。对Gal-1和MGL协同诱导T细胞凋亡的作用及机制研究，不仅有助于揭示白血病细胞免疫逃逸的分子机制，同时也将为研发阻断白血病细胞诱导T细胞凋亡的药物前体提供重要的前期实验基础。关键词：半乳凝素-1；巨噬细胞半乳糖型凝集素；T细胞；凋亡；凋亡诱导因子IIAbstractItisoneofimportantmechanismsfortumorescape,whichinducesTcell

6、apoptosisandreducesthebodycellimmunity.Previousstudieshavefoundthatgalectin-1(Gal-1)caninduceTcellapoptosisthatissecretedbymalignantcell.Moreover,macrophagegalactose-typelectin(MGL)canalsoinduceTcellapoptosis,whichexpressedonimmaturedentriticcells(iDC)andtolerogenicdentriticcell(tDC).However

7、,itisunknownwhichsignalpathwayprimesTcellapoptosisandwhetherMGLcooperatedwithGal-1inducesTcellapoptosis.Inthisstudy,firstly,wepurifiedGal-1proteinofinducibleexpressioninvitro,followedbyconstructionoftheprokaryoticexpressionvectorofGal-1.Secondly,we