结核杆菌对感染宿主巨噬细胞凋亡的调控作用及其机制研究

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1、分类号：R183.3密级：学号：2010109062单位代码：10759石河子大学硕士学位论文结核杆菌对感染宿主巨噬细胞凋亡的调控作用及其机制研究学位申请人董伟杰指导教师张万江教授申请学位门类级别医学硕士学科、专业名称免疫学研究方向感染免疫所在学院医学院中国·新疆·石河子2013年5月StudyontheregulationandmechanismthatMycobacteriumtuberculosisreactsattheapoptoticofhostmacrophageADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInParti

2、alFulfillmentoftheRequirementsFortheDisgreeofMasterofMedicineByDONGWei-jie(Immunology)DissertationSupervisor:Prof.ZHANGWan-jiangMay,2013石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究生签名：时

3、间：年月日使用授权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日目录中文摘要…………………………………………………………………………………Ⅰ英文摘要…………………………………………………………………………………Ⅱ英汉缩略语名词对照………………………………………………………………

4、……IV前言………………………………………………………………………………………11材料……………………………………………………………………………………32方法……………………………………………………………………………………93结果……………………………………………………………………………………164讨论……………………………………………………………………………………28结论……………………………………………………………………………………32参考文献…………………………………………………………………………………33文献综述…………………………………………………………………

5、………………36致谢……………………………………………………………………………………43作者简介…………………………………………………………………………………44导师评语…………………………………………………………………………………45摘要目的：构建结核分枝杆菌感染RAW264.7巨噬细胞的模型，探讨不同毒力的结核分枝杆菌感染对巨噬细胞凋亡的调控作用及其机制。方法：1.用结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv株和卡介苗BCG分别感染巨噬细胞RAW264.7株，同时设空白对照组，在感染后1h、6h、12h及24h，用流式细胞技术检测各组巨噬细胞的凋亡率，分析其时相性变化。2

6、.应用Westernblot和RT-PCR技术检测上述各组各时间点Caspase-3及Bcl-2蛋的表达水平（蛋白水平和基因水平）。结果：1.结核分枝杆菌感染组的凋亡率显著高于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）；BCG感染组早期凋亡率高于H37Rv株感染组，在感染后1h、12h和24h凋亡率升高显著，差异具有统计学意义（P<0.05）。2.结核分枝杆菌感染巨噬细胞后，其Caspase-3蛋白表达增高，结核分枝杆菌感染组的Caspase-3蛋白表达高于对照组，对照组＜H37Rv株感染组＜BCG感染组，差异具有统计学意义（P<0.05）；BCG感染组Caspase-

7、3蛋白表达高于H37Rv株感染组，在感染后1h、12h和24h蛋白表达显著增高，差异具有统计学意义（P<0.05）。3.结核分枝杆菌感染组Caspase-3基因相对表达量高于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）；BCG感染组Caspase-3基因表达高于H37Rv株感染组，在感染后1h和24h表达显著增高，差异具有统计学意义（P<0.05）。4.结核分枝杆菌感染组的Bcl-2蛋白表达低于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）；H37Rv感染组在1h、6h和24h的Bcl-2蛋白表达高于BCG感染组，差异具有统计学意义（P<0.0