结核杆菌对感染宿主巨噬细胞应激的调控作用及其机制研究

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1、分类号：R378密级：学号：2010109022单位代码：10759石河子大学硕士学位论文结核杆菌对感染宿主巨噬细胞应激的调控作用及其机制研究学位申请人刘丹霞指导教师张万江教授申请学位门类级别医学硕士学科、专业名称病理学与病理生理学研究方向感染性疾病的发病机制与防治所在学院医学院中国·新疆·石河子2013年5月StudyontheregulationandmechanismthatmycobacteriumtuberculosisreactsatthestressofhostmacrophageADissertationSubmittedtoShihe

2、ziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsFortheDegreeofMasterofMedicineByLiuDanXia(Pathologyandpathophysiology)DissertationSupervisor:Prof.ZhangWanJiangMay,2013石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文

3、的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究生签名：时间：年月日使用授权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日摘要目的:探讨研究不同毒力的结核分枝杆菌对感染宿主巨噬细胞应激的调控作用及其机制。方法:1以结核分枝杆菌国际标准强

4、毒株H37Rv菌株(简称H37Rv菌株)和卡介苗菌株(简称BCG菌株)分别感染小鼠巨噬细胞(RAW264.7),在感染1、6、12及24小时后,分别采用化学比色法检测各组感染巨噬细胞的超氧化物歧化酶(SOD)和一氧化氮合酶(NOS)的活性及丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量的测定。2采用免疫印迹技术检测各组感染巨噬细胞的Cu/Zn-SOD和iNOS蛋白的表达。3采用RT-PCR方法检测各组感染巨噬细胞的Cu/Zn-SOD和iNOS基因的表达(mRNA水平)。结果:1采用化学比色法检测各组感染巨噬细胞的SOD和NOS活性及MDA和NO含量的测定:BC

5、G菌株感染RAW264.7后细胞内SOD、NOS活性和NO含量逐渐升高,而MDA含量逐渐下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)；H37Rv菌株感染RAW264.7后细胞内SOD、NOS和NO含量逐渐下降,而MDA含量逐渐增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。2采用免疫印迹技术检测各组感染巨噬细胞的Cu/Zn-SOD和iNOS蛋白的表达:BCG菌株感染RAW264.7后细胞内Cu/Zn-SOD表达逐渐升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)；H37Rv菌株感染RAW264.7后细胞内Cu/Zn-SOD表达逐渐下降,与对

6、照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。空白对照组、BCG菌株组、H37RV菌株组感染RAW264.7后细胞内iNOS蛋白的表达无差异,为了进一步研究不同毒力结核分枝杆菌感染巨噬细胞的iNOS的蛋白表达差异,我们将对iNOS基因表达分析。3采用RT-PCR方法检测各组感染巨噬细胞的iNOS和Cu/Zn-SOD基因的表达(mRNA水平):BCG菌株感染RAW264.7后细胞内Cu/Zn-SODmRNA和iNOSmRNA水平逐渐升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)；H37Rv菌株感染RAW264.7后细胞内Cu/Zn-SODmRNA和iNO

7、SmRNA水平逐渐下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1结核分枝杆菌感染宿主巨噬细胞导致巨噬细胞应激,感染巨噬细胞的应激与菌株毒力强弱有关。2低毒力的结核分枝杆菌对宿主巨噬细胞应激发挥诱导作用。3高毒力的结核分枝杆菌对宿主巨噬细胞应激发挥抑制作用。关键词:结核分枝杆菌；巨噬细胞；应激；调控；机制论文类型:A(基础研究)IABSTRACTObjective:Tostudythefunctionandmechanismofregulatingandcontrolingthatdifferentvirulenceofmycobacter

8、iumtuberculosisreactsatthestressofinfectedhostm