结核杆菌hsp16.3对感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响及其机制研究

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1、结核杆菌Hsp16.3对感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响及其机制研究分类号：R34密级：学号：2009109026单位代码：10759石河子大学硕士学位论文结核杆菌Hsp16.3对感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响及其机制研究学位申请人董江涛指导教师张万江申请学位门类级别医学硕士学科、专业名称免疫学研究方向感染免疫所在学院医学院中国〃新疆〃石河子2012年5月1结核杆菌Hsp16.3对感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响及其机制研究MycobacteriumtuberculosisHsp16.3infectedalveolarmacrop

2、hageinmiceanditsapoptosisresearchofmechanismADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineByDongjiang-tao(Immunology)DissertationSupervisor:Prof.May,20122结核杆菌Hsp16.3对感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响及其机制研究石河子大学学位论文独创性声明及使用

3、授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究生签名：时间：年月日使用授权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅。有权将学位论文的内容编入有关数据进行检索。有权

4、将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日3结核杆菌Hsp16.3对感染小鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响及其机制研究目录中文摘要………………………………………………….……………Ⅰ英文摘要……………………………………………….………………Ⅲ英文缩略词…………………………………………….………………Ⅴ前言……………………………………………………………………..1材料与方法…………………………………………….……………….3结果……………………………………………………

5、………….……10讨论……………………………………………………………………19结论……………………………………………………………….……22参考文献………………………………………………………………23文献综述…………………………………………………………….…26致谢...…………………………………………...………....………...….32作者简介………………………………………………….…………….33导师评阅表…………………………..……………....…....…………...354结核杆菌Hsp16.3对感染小鼠肺泡巨噬细

6、胞凋亡的影响及其机制研究摘要目的：比较分析和探讨研究不同毒力的结核分枝杆菌菌株感染宿主巨噬细胞后，诱导表达合成的结核分枝杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3，对宿主巨噬细胞调亡的调控作用及其机制，进一步明确结核分枝杆菌干预和调控巨噬细胞凋亡的途径和机制，揭示结核分枝杆菌与宿主巨噬细胞相互作用的重要机理,为阐明结核病的发病机制提供理论依据。方法：通过结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株和BCG菌株悬液分别进行小鼠尾根部皮内注射，建立小鼠结核分枝杆菌感染模型，诱导小鼠肺泡巨噬细胞活化，并产生较强的抗结核免疫效应，在感染后第1天、

7、第3天、第5天、第7天、第9天、第11天、第13天、第15天，八个不同的时间点，进行小鼠肺泡灌洗，从灌洗液中提取，并收集、纯化小鼠肺泡巨噬细胞。利用激光共聚焦显微镜技术检测和鉴定结核分枝杆菌感染小鼠肺泡巨噬细胞结核分枝杆菌小分子热休克蛋白HSP16.3分泌表达模型，同时观察感染小鼠肺泡巨噬细胞的形态学变化，然后利用PCR基因扩增技术和WesternBlot技术检测结核分枝杆菌小分子热休克蛋白HSP16.3在基因水平和蛋白水平的表达差异，同时利用流式细胞技术检测不同毒力的结核分枝杆菌菌株分别感染小鼠肺泡巨噬细胞后，不同感染组，不

8、同时间点的小鼠肺泡巨噬细胞的凋亡率及其时相性变化。结果：利用激光共聚焦显微镜下观察到，结核分枝杆菌H37Rv菌株组和BCG菌株组的大部分小鼠肺泡巨噬细胞内均出现了特异性抗体标记的绿色荧光，而对照组无荧光出现。观察结果表明：感染小鼠肺泡巨噬细胞内吞噬有大量结核分枝杆菌，并且有结