广州管圆线虫Galectin-1诱导巨噬细胞凋亡的机制研究

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1、分类号：R3单位代码：10343学号：151006843硕士学位论文论文题目:广州管圆线虫Galectin-1诱导巨噬细胞凋亡的机制研究研究生姓名：史晓萌学科专业：病原生物学类型：学术型指导教师：黄慧聪教授二O一八年五月温州医科大学硕士学位论文论文题目:广州管圆线虫Galectin-1诱导巨噬细胞凋亡的机制研究答辩委员会主席：江陆斌研究员答辩委员会成员：张青锋教授文金生教授论文答辩日期：2018年5月26日温州医科大学硕士学位论文目录中文摘要………………………………………………………………1英文摘要………………………………………………………………4前言…………

2、……………………………………………………7正文……………………………………………………………10第一部分Ac-Galectin-1诱导巨噬细胞凋亡现象材料与方法…………………………………………………………10结果………………………………………………………………19分析与讨论…………………………………………………………25第二部分Ac-Galectin-1与巨噬细胞膜上AnnexinA2相互作用材料与方法…………………………………………………………27结果………………………………………………………………33分析与讨论…………………………………………………………3

3、8第三部分Ac-Galectin-1诱导巨噬细胞凋亡的信号通路研究材料与方法…………………………………………………………39结果………………………………………………………………43分析与讨论…………………………………………………………47小结……………………………………………………………49参考文献……………………………………………………………50附录(一)……………………………………………………………54附录(二)……………………………………………………………55致谢…………………………………………………………………56综述：寄生虫半乳糖凝集素的研究进展……

4、……………………57独创性声明…………………………………………………………65温州医科大学硕士学位论文广州管圆线虫Galectin-1诱导巨噬细胞凋亡的机制研究中文摘要广州管圆线虫病(Angiostrongyliasis)是由于感染广州管圆线虫(Angiostrongyluscantonensis，Ac)而引起的。广州管圆线虫病并作为一种重要的人兽共患寄生虫疾病，主要发生在中国、东南亚和南太平洋地区，该病可引起严重的中枢神经系统感染症状，严重者可导致瘫痪或死亡。本课题组前期研究发现Ac-Galectin-1在广州管圆线虫生长发育阶段发挥着重要的作用，是构成虫体

5、体壁的重要成分，促进幼虫发育成成虫；Ac-Galectin-1可以通过抑制IFN-γ，IL-5分泌发挥免疫抑制作用，Ac-Galectin-1还促进Treg细胞聚集，发挥免疫下调作用。半乳糖凝集素在细胞内外均可以发挥其生物学功能，当分泌到胞外时，主要发挥凝集素的功能，包括细胞-细胞、细胞-细胞外基质的相互作用，细胞活化，细胞自噬，细胞凋亡和细胞因子分泌等。由于半乳糖凝集素可以和细胞膜上的多种糖蛋白受体形成不同类型的晶格结构，从而导致不同的跨膜信号通路被激活，因此，半乳糖凝集素可以广泛参与调节多方面的生物学过程。但广州管圆线虫Galectin-1的功能研究未见报

6、道。根据广州管圆线虫的生活史，广州管圆线虫幼虫进入人体后会有一个阶段存活在血液里，最终到达脑脊液中。具有免疫调控作用的广州管圆线虫的分泌组分在免疫应答中的作用值得深入研究，巨噬细胞作为抗原提呈细胞和非特异性免疫细胞，它们在感染免疫中的快速动员及Ac-Galectin-1对其的作用直接影响免疫应答的发生发展。由于外周血来源的单核巨噬细胞较难获取、获取细胞数量较少以及血液来源存在个体差异，因此我们采用THP-1来进行研究。本实验以经过佛波酯刺激的THP-l细胞分化为贴壁的巨噬细胞为研究对象，旨在通过观察Ac-Galectin-1对THP-1的作用及具体机制，为广州

7、管圆线虫侵入后其分泌蛋白的免疫调控作用的研究提供一定的实验基础。目的1.镍柱亲和层析方法纯化得到广州管圆线虫Galectin-1重组蛋白；2.Ac-Galectin-1作用于THP-1来源的巨噬细胞，观察凋亡现象及凋亡相关蛋白的表达；3.筛选与验证与Ac-Galectin-1相互结合的THP-1细胞膜表面受体蛋白；4.探究Ac-Galectin-1诱导巨噬细胞凋亡的相关信号通路蛋白，揭示广州管圆线虫Galectin-1重组蛋白诱导该细胞凋亡的相关机制。方法1.Ac-Galectin-1蛋白纯化及Ac-Galectin-1诱导巨噬细胞凋亡的检测1温州医科大学硕士

8、学位论文重组广州管圆线虫Galecti