鹅肥肝形成过程中调控scd1基因的mirna研究

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1、..密'一--忘浑方-.餐早^^&^^旁;減:'、'*...一?少旗馬.*,^.馬----一...三.據叫大聲若^产4.一.;1一如-^YANGZHOUUN’yERSITY、’巧!.考義IJ户气_^^硕壬学位:.'、'、;-'.去-*%皆-玄片刘kA^子A:^..(韓型):、V.、於補,:诚户Ri'‘?、''..'’t-,...'Viyj-.三:二:二二^r苗若-品肝形成过程中调控scm基因的miRNA研究f聲V.记'’"'分-古一户J'一’一*?"-.'处-一f'.

2、方,..;#/.'為'’产-户-'?''?三:;,?:立?:乂与三 ̄—:';;/八.今巧舍.養-三式人、.孙晓若苗"^?^;::;4?‘.:.乃J知吹‘—八八捶令.'、、指导教师姓名;袭道清教授,扬州大学,江苏扬州,225009申请学位级别:动物营养与饲抖科学:硕去学科专业名称论文提交日期;2015年5月论文答辩日期;2015年5月24日学位授予单位;扬州欠学学位授予口期:2015年6月23日答辩委员会猶:王金玉教授'.,W!户万入、、?八息-托為,泉X户,、.,追、媒,^方^

3、、、二^二資‘知一^一-..*参*杂殺?全令去:左择是六.幾,"'给呼#-欄年5月迄茲才一;^讀务或:幾专占朵4T勺^-t之為苦苗睾狂%卷為.份勘藻义:-誠矜.鹤肥肝形成过程中调控SCDl基因的miRNA硏究*TheanalsisofmiRNAwhichieulateSCD1eneinooseygggfattyliver研究生:孙晓先专业:动物营养与饲料科学导师:粪道清教授本项目由国家自然科学基金(31072021和31372298)资助SupportedbytheNation

4、alNaturalScienceFoundationofChina31072021&31372巧8()扬州大学动物科学与技术学院2015年5月I中文摘要m一icroRNA(miRNA)是类约22nt的内源性非编码单链RNA分子,它广泛存在于、病毒动物和植物等多种生物体中,通过与郎基因3TJTR区结合,使得範mRNA翻译抑1制或降解,从而对基因的表达起负性调节作用,是基因表达的重要调控因子。SCD是位一于内质网上的类催化酶,是肝细胞合成单不饱和脂肪酸的限速酶,能够将软脂蘇和硬脂酌辅酶A分别转化成栋

5、搁油酸和油酸,这些不饱和脂肪酸是合成各种脂类包括甘油H酷、憐脂、胆固醇、蜡酷W及甘油二酷的重要底物。SCD1在肝脏的脂质代谢中,即在脂肪合成与脂肪酸氧化中,都发挥着举足轻重的作用,本实验对朗德鶏肝脏SCD1基因的表达及其调控miRNA进行筛选研究。主要实验结果如下:(1)填饲过程中,朗德瓣的巧脏重量和肝体比随着填饲时间的延长逐斯増加,70日龄(填伺0天)时巧脏的平均重量为124.58919g,日龄(填饲天)时肝脏平均重量上升为826.6g;70日龄时平均肝体比为3.21%,89日龄化平均肝体比达10.30%。本实验采用焚光

6、定量PCR测定朗德瓣SCD1基因在填饲各阶段和对照组各阶段表达量变化趋势,1989结果显示填饲组各阶段表达量均高于对照组,且填饲天(日龄)时,填饲组表达量极显著高于对照组;测定填饲组各时期栋桐油酸、油酸、甘油H酷和胆固醇含量,并分析、填饲组各阶段SCD1基因与各指标之间的相关性,SCD1基因表达量与油酸、胆固醇VLDLPOOlP<005)。极显著正相关(.),与甘油H醋含量显著正相关(.(2)通过软件预测结合前期小RNA测序结果,筛选出调控鶴SCD1基因的miRNAi-m---为mR30b,iR30a5p和miRlOb,利用SY

7、BRGreen染料法萊光定量PCR测定各miRNA在填饲组各时期与对照组各时期表达量变化情况,对照组表达量均高于填饲组,与SCD1基因的表泣变化情况相反。----(3)从朗德鹤中扩增出鹤miR30b和miR30a5p前体序列,经测序,与鸡的miR30b和m--。iR30a5p前体同源性都达到100%利用双焚光素酶报告系统在CHO细胞系中验证3--所筛选的个miRNA,结果显示miR30b与miR30a5p为调控鹤SCD1基因的miRNA。---揭示miR30b和miR30a5p可能通过对SCD1基因的调节作用影响豬肝脏脂代谢过

8、程。关键词:S畑1基因;鶴肥肝;miRNA;脂肪代谢mABSTRACTa

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