长链非编码rna-x53654对肺上皮增殖、迁移和放射敏感性的影响及机制的研究

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1、SOOCHOWUNIVERSITY论文题目长链非编码RNA-X53654对肺上皮增殖、迁移和放射敏感性的影响及机制的研究研究生姓名姚亦帆指导教师姓名焦场专业名称临床医学（放射医学）研究方向月幅放射生鮮2015年5月论文提交日期苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名

2、期：苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在年—月解密后适用本规定。非涉密论文‘论文作者签名期：MS.二巧长链非编码RNA-X536

3、54对肺上皮增殖、迁移和放射敏感性的影响及机制的研究中文摘要中文摘要目的：本研究通过建立稳定高表达lncRNA-X53654的Beas-2B细胞株，对差异性表达的基因进行筛选分析，并在体外水平研究X53654对肺上皮细胞增殖、迁移侵袭及辐射敏感性的影响。方法：（1）通过脂质体介导的质粒转染及G418筛选构建稳定高表达X53654的Beas-2B细胞株；（2）利用表达谱芯片筛选分析在高表达X53654的细胞中差异性表达的蛋白质编码基因并通过GO分析和KEGG分析归纳其影响的生物学功能及通路；（3）运用MTT法、流式细胞术、划痕、Transwell和明胶酶谱等试验验证X53

4、654对Beas-2B细胞增殖、迁移和侵袭的影响，并通过WesternBlot验证X53654对上述生物学功能相关蛋白表达的调控；（4）通过RT-PCR验证电离辐射作用后Beas-2B细胞中X53654表达水平的改变；然后运用克隆形成试验验证细胞辐射敏感性的改变；应用流式细胞术检测照后细胞周期的变化；同时采用免疫荧光试验检测γH2AX的形成能力；采用彗星试验检测彗尾形成程度；最后通过WesternBlot检测DNA损伤修复相关蛋白的表达。结果：（1）成功建立稳定高表达lncRNA-X53654的Beas-2B细胞株，通过表达谱芯片筛选分析发现差异性表达的基因集中于免疫、

5、炎症反应、RNA作用机制、细胞骨架运动性以及DNA损伤检查点等方面。（2）高表达X53654可以引起细胞增殖能力增强、迁移能力降低以及侵袭能力增加，WesternBlot验证了Occludin、Claudin1表达下调，MMP-2、MMP-9和β-catenin表达上调，同时TGF-β1、Samd3、SNAIL表达升高。（3）高表达X53654的Beas-2B细胞辐射敏感性降低，照后G1/S阻滞较对照组明显，γH2AX形成增多，彗尾减轻。WesternBlot验证ATM、phospho-ATM、Ku80、DNA-PK、TGF-β1和Smad3表达上调，phospho-B

6、RCA表达无明显改变，MRE11、Rad50表达下调。结论：高表达lncRNA-X53654可能通过引起细胞周期运转速率加快而引起细胞增殖能力增强；同时X53654可使细胞紧密连接蛋白表达减弱，侵袭能力增强，可能是TGF-β/Smad3通路激活引起的上皮表型转换引起；高表达X53654引起细胞辐射抗性增加可能是由于TGF-β/Smad3通路激活引起非同源末端连接修复增强引起，但其确切机制需要进一步研究。I长链非编码RNA-X53654对肺上皮增殖、迁移和放射敏感性的影响及机制的研究中文摘要关键词：放射性肺损伤；长链非编码RNA；增殖；迁移；侵袭；放射敏感性；DNA损伤修

7、复；TGF-β作者：姚亦帆指导老师：焦旸副教授II长链非编码RNA-X53654对肺上皮增殖、迁移和放射敏感性的影响及机制的研究英文摘要Studyoneffectsandmechanismsoflongnon-codingRNAsonproliferation,migrationandradiosensitivityinpulmonaryepithelialcellsAbstractAim:ToscreendifferentiallyexpressedmRNAsinX53654-overexpressingBeas-2Bcellline,