tob1对人类肺癌细胞增殖、转移和放射敏感性的影响及机制的研究

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1、SOOCHOWUNIVERSITY七年制硕士专业学位论文论文题目TOB1对人类肺癌细胞增殖、转移和放射敏感性的影响及机制的研究研究生姓名孙克康指导教师姓名焦旸专业名称临床医学研究方向肿瘤放射生物学论文提交日期2012年5月TOB1对人类肺癌细胞增殖、转移和放射敏感性的影响及机制的研究摘要摘要目的：本课题通过建立TOB1稳定高表达及表达抑制的肺癌细胞株，研究TOB1在体外对肺癌细胞增殖、转移、侵袭及放射敏感性的影响，并初步探讨其相关机制。方法：采用RT-PCR和Westernblot法检测人类正常支气管上皮细胞HBE和八种肺癌细胞株中TOB1表达水平的差异，通过脂质体介导的重组质

2、粒转染及G418筛选，建立TOB1稳定转染株，同时采用RNA干扰法抑制TOB1的表达；应用MTT实验、流式细胞术、体外划痕及Transwell实验研究TOB1对肺癌细胞95-D和A549增殖、细胞周期分布以及转移侵袭的影响。采用Westernblot和明胶酶谱实验检测TOB1对肺癌细胞中细胞周期和转移侵袭相关蛋白的表达及基质金属蛋白酶家族(MMPs)活性的影响。采用克隆形成实验、流式细胞术、免疫荧光实验检测TOB1对肺癌细胞电离辐射后克隆形成能力、细胞周期分布及γ-H2AXfoci形成数目的影响，同时应用Westernblot实验检测TOB1对肺癌细胞电离辐射后细胞周期及DNA

3、损伤修复相关蛋白表达的调控。采用免疫共沉淀及Westernblot法初步探讨其相关机制。结果：成功构建TOB1高表达的95-D和NCI-H1975细胞稳定株，发现TOB1高表达显著抑制95-D细胞的增殖、转移及侵袭能力，并引起95-D细胞发生明显的G1期阻滞。Westernblot及明胶酶谱实验发现TOB1高表达下调95-D细胞中周期相关CyclinD1、CyclinB1、CyclinE以及α-catenin、β-catenin、γ-catenin、MMP2、MMP9等转移侵袭相关蛋白的表达，同时抑制MMP2、MMP9的活性。TOB1高表达显著降低NCI-H1975细胞的克隆形

4、成能力，降低电离辐射引起的肺癌细胞G2/M期阻滞，增加电离辐射引起的γ-H2AXfoci的数目。Westernblot结果显示TOB1高表达降低DNA-PKcs、Ku70、Ku80、XRCC4的表达。利用siRNA抑制肺癌A549细胞中TOB1的表达在增殖、转移及放射敏感性方面与TOB1高表达均呈现相反的表现。免疫共沉淀及Westernblot实验发现TOB1与PTEN存在相互结合，并且TOB1影响EGFR/MAPK信号通路的活化。结论：TOB1在体外参与对肺癌细胞增殖、转移和侵袭能力的调控，并可以影I摘要TOB1对人类肺癌细胞增殖、转移和放射敏感性的影响及机制的研究响肺癌细胞

5、的放射敏感性，机制可能与TOB1通过与PTEN存在相互结合，影响EGFR/MAPK信号通路的活化有关。关键词：肺癌；TOB1；增殖；转移；侵袭；细胞周期；放射敏感性；DNA损伤；PTEN；EGFR/MAPK作者：孙克康指导老师：焦旸副教授IITOB1对人类肺癌细胞增殖、转移和放射敏感性的影响及机制的研究英文摘要StudiesontheeffcetsandmechanismsofTOB1ontheproliferation,metastasisandradiosensitivityoflungcancercellsAbstractAim:Toinvestigatetheeffec

6、tsofthetransduceroferbB-2.1(TOB1)ontheproliferation,metastasisandradiosensitivityofhumanlungcancercellsinvitro.Methods:TOB1expressionineighthumanlungcancercelllines(95-D,A549,NCI-H1299,NCI-H1975,NCI-H661,NCI-H446,NCI-H1395andCalu-3)andthenormalhumanbronchialepithelial(HBE)celllinewasdetermin

7、edbyWesternblotandRT-PCRanalysis.TOB1-overexpressedcelllines95-D/TOB1,NCI-H1975/TOB1wereobtainedusinglipofectamine-inducedTOB1recombinantplasmidtransfectionandselectiveG418cellculture.TOB1knockdownwasperformedusingRNAiinA549cells.MTTassay,flowcytom