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1、姜黄素对CNE-2细胞放射敏感性和机制影摘要：目的：探讨姜黄素（Cur）对鼻咽癌细胞CNE-2放射敏感性及机制的影响。方法：克隆形成实验检测姜黄素对细胞放射敏感性的影响，Graphprism6.0拟合细胞存活曲线；流式细胞术（FCM）分析细胞周期变化；基因芯片技术检测细胞长链非编码RNA表达差异，Real-timePCR验证部分差异表达基因。结果：10Pmol•L-lCur作用24h后,其放射增敏比1.03,表明低浓度的Cur可以增加鼻咽癌细胞的放射敏感性;FCM显示Cur联合照射组G2期细胞显著增加,S期细胞显著下降。GUCY2GP,H2BFXP,LINC00623等
2、IncRNA在姜黄素组细胞中显著上调，ZRANB2-AS2,L0C100506835,FLJ36000等IncRNA在姜黄素组细胞中显著下调。结论：Cur对人鼻咽癌细胞CNE-2具有放射增敏作用，其机制可能与改变细胞周期的分布和长链非编码RNA的表达有关。关键词：姜黄素；放射增敏；细胞周期；基因芯片；长链非编码RNA［收稿日期］2013-05-27［基金项目］国家自然科学基金项目（81173616）；广东省科技计划项目（2013A03250003）；广州市海珠区科技计划项目(2013-cg-29)［通信作者］*范钦，副研究员，Tel:13688859758,E-mail
3、：fqin@163・com［作者简介］王启瑞，讲师，博士，E-ma订：wqrv@hotmaiLcom鼻口因癌（nasopharyngealcarcinoma,NPC）是我国南方地区的一种常见恶性肿瘤，占我国头颈部恶性肿瘤的首位，病因与遗传有一定关系。由于其特殊的病理类型、生物学行为和解剖结构，放射治疗（放疗）仍是首选的治疗方法。然而单纯放疗的鼻咽癌病人5年生存率约为50%,治疗失败的原因之一是鼻咽癌组织中存在一定比例（10%〜20%）对放射线有抗拒作用的细胞，而且这些具有抗拒作用的细胞使肿瘤更具有侵袭性，容易发生淋巴结及远处转移［1］。因此研究其放射抗拒的机制、寻找放射
4、增敏途径成为亟待解决的问题。研究发现姜黄素（curcumin,Cur）对多种恶性肿瘤有抑制作用［2-4］,并能增加肿瘤细胞对放射线照射的敏感性［5］。本研究拟探讨Cur对人鼻咽癌细胞CNE-2是否具有放射增敏作用，并研究其增敏机制，为寻找NPC的放射增敏剂提供理论依据。1材料1.1细胞培养人低分化鼻咽癌CNE-2细胞株（中山大学肿瘤防治中心惠赠），培养于含有10%热灭活胎牛血清的RPMI-1640培养液中，37°C,5%C02,饱和湿度条件下培养。选取对数生长期细胞进行实验。1.2药品与试剂姜黄素（中国食品药品检定研究院，批号110823-201004）；胰蛋白酶、RP
5、MI-1640培养液（吉诺生物医药技术有限公司）；四季青胎牛血清（浙江天杭生物科技有限公司）；细胞周期检测试剂盒（碧云天生物技术研究所）；RNA提取试剂、RT-PCR试剂盒及所用酶（TaKaRa生物公司）；SBCCustomHumanIncRNA8*60K芯片由上海伯豪生物技术有限公司提供并检测。1.3仪器二氧化碳培养箱（ThermoScientific）,超净工作台（苏净集团安泰公司），流式细胞仪（BDFACSCalibur,美国），直线加速器（varian.600C/D,美国）。2方法2.1克隆形成试验检测姜黄素联合照射对CNE-2细胞的放射增敏作用将处于对数生长期
6、细胞按照不同吸收剂量接种不同细胞数至6孔板中，分为姜黄素组和照射组，姜黄素组给予10nmol•L-1的姜黄素作用24h后，与照射组一起分别接受0,2,4,6,8Gy6MV的X射线照射，继续培养2周，甲醇固定，吉姆萨液染色30min,自然晾干后进行克隆计数。细胞数250个的集落被作为存活克隆予以计数。集落形成率（PE）二形成集落数/细胞接种数X100%；存活分数（SF）二实验组集落形成率/对照组集落形成率。1.2流式细胞术检测姜黄素联合照射对CNE-2细胞周期的影响取对数生长期细胞，经0.25%胰酶消化，接种于6孔板中，分为空白对照组、姜黄素组(10nmol-L-1).照
7、射组、姜黄素(10umol-L-1)+照射组。姜黄素预处理24h后照射，照射后24h收集细胞。收集的细胞以PBS洗涤，1000r•min-1离心4min,2次，加入含RNaseA的PI染色液0.5mL,37°C避光染色30min,上机检测。2.3基因芯片检测姜黄素对CNE-2细胞长链非编码RNA的影响取对数生长期细胞，接种于6孔板中，分为空白对照组、姜黄素(10umol•L-1)组。给予10Umol•L-1的姜黄素作用24h后，分别培养12〜24h,Trizol抽提细胞RNA,IncRNA芯片由上海伯豪生物科技有限公司提供并检测。将实验结
