shrna-hiap2增强cne-1鼻咽癌细胞对放射敏感性的实验研究

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1、万方数据中图分类号UDCR73．34610硕士学位论文学校代码密级10533ShRNA．hIAP2增强CNE．1鼻咽癌细胞对放射敏感性的实验研究ShRNA--hIAP2enhancingradiationeffectonnasopharyngealcarclnOmace儿-●■●作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：袁媛临床医学肿瘤学湘雅医院姜武忠教授论文答辩日期丝≥：!!：：!答辩委员会主席中南大学2013年1O月多十匕p万方数据学位论文原创性声明嘲本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，

2、除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：耘羡日期：号年旦月翌日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩

3、印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：日期：丝殳年上月互日翮签名丛移隰号年旦月堑日万方数据摘要鼻咽癌作为中国地域常见的一种恶性肿瘤，其发病起于鼻咽粘膜被覆上皮，自然生存时间平均为18．7个月，起病隐蔽，早期不易被发现。发病者多分布于我国两广地区、沿海省份福建、中南地区如湖南等，从性别上来看，女性发病率小于男性。从发病年龄上来看，以中年人为主。从种族易感性上来看，白种人发病率小于黄种人，从病因上来看，其发病与人类疱疹病毒感染和某些遗传因素等有关系。目前，治疗手段以放射治疗为主。从已有的国内外报道可知，鼻咽癌放射治疗后5年生存率

4、为60％左右。随着放射治疗设备更新，放射治疗技术改进，鼻咽癌放射治疗后的5年生存率不断提高。上海某肿瘤医院报告，1955年以前应用深度X线治疗，5年生存率为8％，1983年5年生存率为54％。鼻咽癌放疗后的局部复发和远处转移是病人死亡的主要原因，复发与转移是鼻咽癌多种生物效应的结果，因此除了要改进放疗技术，提高放疗效果外，还要对鼻咽癌的生物学特性，鼻咽癌病人机体方面的因素以及肿瘤与病人机体相互作用等因素进行研究。根据病人机体鼻咽癌的生物学特性，在治疗上从放疗、化疗、免疫治疗、基因治疗、中医中药和其他治疗方法上综合考虑，选择和制定适宜的治疗方案，以进一步提高疗

5、效。本研究以鼻咽癌细胞系CNEl为研究对象，构建shRNA．hIAP2，采用RNA干扰为手段，采用脂质体介导的转染方法，研究hlAP2对增强CNEl细胞株对于放射敏感性的影响，初步探讨其作用机制，为临床基因辅助治疗打下一定基础。目的：构建凋亡抑制蛋白(hlAP．2)的shRNA，靶向抑制hlAP-2基因联合放疗，探讨其对CNEl鼻咽癌细胞株放射敏感性的影响。方法：首先采用MTT法确定最佳放射剂量；再构建四条hlAP．2．shRNA沉默片段并用脂质体法转染CNEl细胞，最后采用实时荧光定量PCR(Q．PCR)和免疫印迹法(WB，Westernblot)筛选出最

6、佳沉默shRNA序列；用最佳沉默shRNA序列转染CNEl细胞，分别设置转染放射线照射组与未转染放射线照射组，采用实时定量PCR和WB检测hIAP．2的基因及蛋白表达，采用ICC检测hIAP．2在CNEl细胞中的表达，流式细胞术测细胞凋亡，transwell测细胞侵袭能力。结果：MTT法确定4Gy为最佳放射剂量；Q．PCR和WB检测结果显示四条hlAP．2．shRNA均能有效抑制hlAP．2mRNA及蛋白表达II万方数据(P

7、A2后照射组与未转染hlAP．2．shRNA2照射组的CNEl细胞中hIAP．2基因与蛋白表达有显著差异(P<0．05)；流式细胞术检测结果显示转染hlAP．2．shRNA2后照射组比未转染11IAP．2．sl诹NA2照射组凋亡率有显著差异(P

8、方数据ABSTRACTNPCisoneofcommo