绿原酸对体外培养的人鼻咽癌细胞株CNE-1的作用.pdf

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1、第35卷第6期西安交通大学学报(医学版)Vo1．35No．62014年11月JournalofXi’anJiaotongUniversity(MedicalSciences)Nov．2014◇中医药研究◇绿原酸对体外培养的人鼻咽癌细胞株CNE一1的作用姚素艳，李全胜，郑德宇。(1．辽宁医学院病理生理学教研室，辽宁锦州121001；2．盘锦市中心医院耳鼻喉科，辽宁盘锦124000；3．辽宁医学院解剖学教研室，辽宁锦州121001)摘要：目的探讨绿原酸(chlorogenicacid，CHA)对体外培养状

2、态下人鼻咽癌细胞株CNE一1的作用及其机制。方法在无菌状态下复苏人鼻咽癌细胞株CNE-1，取传4代的细胞，向培养基内加入CHA，使其终浓度达到0、25、50、100、200、500／lmol／L，应用CCK8体外抑制实验进行筛选CHA的最佳抑癌浓度。选择CHA最佳抑癌浓度，作用于CNE一1细胞系。检测人鼻咽癌细胞株CNE一1中端粒酶活性、抑癌基因p27和pl6的表达、细胞周期蛋白(cyclinD1)和细胞周期蛋白依赖激酶(CDK4)的表达。结果经CCK一8体外抑制实验进行筛选CHA的最佳抑癌浓度为10

3、0／~mol／L。人鼻咽癌细胞株CNE-1的培养基中加人终浓度为100#mol／L的CHA，维持10d，CNE一1细胞株中其端粒酶活性为1．621，远低于试剂盒中的阳性对照和未处理的CNE一1细胞株，差异具有统计学意义(P<0．01)。应用CHA处理CNE一1细胞株10d后，抑癌基因p27和p16均有少量的表达，而在阳性对照组(HT1080细胞)和未处理的CNE一1细胞几乎没有表达。应用CHA处理CNE一1细胞株10d后，cyclinD1和CDK4的表达量与阳性对照组(HT1080细胞)和未处理的CN

4、E1细胞相比明显降低。结论应用100／lmol／ICHA10d，可以降低CNE一1细胞株端粒酶活性、增加抑癌基因的表达，降低细胞周期蛋白的表达。CHA对人鼻咽癌细胞株CNE一1的作用是通过活化抑癌基因和抑制细胞周期蛋白的表达来实现的。关键词：绿原酸；鼻咽癌；抑癌基因；细胞周期蛋白；端粒酶；p27；pl6中图分类号：R766．3文献标志码：ADOI：10．7652／jdyxb201406022Effectsofchlorogenicacidonculturedhumannas0pharyngealcar

5、cinomacelllineCNE一1invitroYAOSu—yan，LIQuan—sheng，ZHENGDe—yu。(1．DepartmentofPathophysiology，Jinzhou121001；2．DepartmentofOtorhino1aryngology，PanjinCentralHospital，Panjin124000；3．DepartmentofAnatomy，LiaoningMedicalCollege，Jinzhou121001，China)ABSTRACT：Objec

6、tiveToexploretheeffectsandmechanismsofchlorogenicacid(CHA)onthehumannasopharyngealcarcinomacelllineCNE一1culturedinvitro．MethodsThehumannasopharyngealcarcinomacelllineCNE．1underwentresuscitationinsterileconditions．CHAwasaddedintotheCNE—lculturemediaatthe

7、concentrationsof0，25，50，100，200and500tzmol／Lfor7days．TheoptimalconcentrationofCHAwhichinhibitedtheCNE一1wasdeterminedbyCCK8inhibitionexperimentinvitro．AfterCNE一1wasculturedattheoptimalconcentrationofCHAfor10days，telomeraseactivationwasdetectedbyELISAmeth

8、od．Theexpressionsofanti—oncogenep27andp16aswellascyclinD1andCDK4weredeterminedbyWesternblot．ResultsTheoptimalconcentrationofCHAforinhibitingCNE-1celllinewas100t~mol／LdeterminedbyCCK8inhibitionexperiment．TelomeraseactivationofCNE-