绿原酸对aβ引起小脑颗粒细胞损伤保护作用

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1、绿原酸对AB引起小脑颗粒细胞损伤保护作用【摘要】目的：探讨绿原酸对淀粉样B蛋白(amyloidbeta-protein,AB)引起的小脑颗粒细胞损伤的保护作用。方法：体外培养小脑颗粒细胞和腹腔巨噬细胞,将经过10umol/LAB预处理48h的巨噬细胞上清液移入神经细胞中，同时加200umol/L的绿原酸。培养2天后，采用MTT法、westernbolt和乳酸脱氢酶检测试剂盒检测细胞活性、微管相关蛋白-2(microtubule-associatedprotein-2,MAP-2)表达水平和乳酸脱氢酶(lacticdehydro

2、genase,LDH)漏出量。结果：将AB预处理的巨噬细胞上清液移入到单独培养的小脑颗粒细胞48h后，可使小脑颗粒细胞活性明显降低，仅为正常的28.35%,加入绿原酸后，细胞活性明显增加达到正常的75.82%(P2.3乳酸脱氢酶检测在正常培养的神经细胞中，乳酸脱氢酶的量只有802nkat/L,但在正常培养的神经细胞+巨噬细胞上清液组中，乳酸脱氢酶漏出量显著升高，达到3046nkat/L,说明神经细胞在加入经AB诱导后的巨噬细胞的培养上清液后，大量的神经细胞受损，导致大量的乳酸脱氢酶的漏出，而同时加入绿原酸后，在很大程度上可以减

3、少由巨噬细胞上清液引起的神经细胞膜的损伤，对神经细胞起到明显的保护作用（表2）。3讨论阿尔茨海默病是以进行性痴呆为主要临床特征的神经系统退行性疾病，其病理特征是大脑皮质和海马区域出现神经元缺失、神经炎性斑块和神经原纤维缠结。阿尔茨海默病造成神经元丧失的主要机制是细胞凋亡。许多学者研究表明，AB对神经细胞没有直接毒性作用，在纯海马神经细胞培养中加入AB,并未出现对神经细胞的杀伤作用［4］。作者对此也进行了初步研究，单独培养的神经细胞中加入AB,只见少量的神经细胞死亡，而经AB孵育的巨噬细胞的上清液能引起大量的神经细胞凋亡。这些结

4、果表明，AB通过激活巨噬细胞，使其释放一些细胞因子，进一步导致神经细胞的凋亡。在单独培养的神经细胞中也出现少量的细胞凋亡，因为在培养神经细胞的过程中即使加入阿糖胞昔，以抑制胶质细胞的生长，但神经细胞不能达到完全纯化，胶质细胞仍存在一定的活性。因此实验中采用AB预处理巨噬细胞，再将上清液加入神经细胞培养基中用以模拟体内的生理状态。绿原酸是从中药杜仲中提取出来的主要活性成分。具有抗炎、抗氧化、抑制氨基酸代谢等药理作用［5］。它能直接对抗炎症介质的作用，降低炎症组织中前列腺素E2的释放量，抑制炎症渗出，从而抑制随后产生的炎症反应。有

5、研究报道，绿原酸的抗炎作用的位点可能是小胶质细胞。本实验结果显示，加入绿原酸组的乳酸脱氢酶漏出量较AB预处理巨噬细胞上清组明显减少，对AB引起的神经细胞膜损伤具有保护作用；MAP-2是细胞骨架中微管的重要组成成分之一,是神经细胞中的标志性微管相关蛋白，分布于胞体、树突及轴突中。MAP-2可反映神经细胞的存活状态和功能，其变化可代表神经细胞病变。应用经AB预处理的巨噬细胞上清可引起神经细胞的微管相关蛋白-2表达明显减少；但在加入巨噬细胞上清液的同时加入绿原酸后，小脑颗粒细胞MAP-2表达明显增加，说明绿原酸能够抑制AB引起的神经

6、细胞膜损伤和神经细胞的死亡，对神经细胞具有保护作用。参考文献：[1]王抒，孙兰，杜冠华.P38MAPK-控制阿尔采末病进程的新靶点[J].中国药理学通报，2004；20(5)：595-8.[2]刘军，刘岚，曹志中，等.肿瘤坏死因子对创伤后牙髓组织修复的调节作用[J].中国临床康复，2004.8(5)：860-1.[3]乌兰，张泽生.金银花中绿原酸的提取及检测[J].食品科学，2011,29(6)：130-134.[4]戚向阳，张声华，陆彩玲等•杜仲叶中绿原酸的提取分离研究[J].中草药，2009,19(11)：741-742.

7、[5]马希汉，尉芹，景谦平•杜仲叶提取绿原酸的中间试验研究[J]・林产化学与工业.2011.35(03)：73-76.