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时间:2018-11-09
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1、丹酚酸抗氧化活性及其对DNA损伤保护作用柳艳,李磊,刘王莹,陈茂勇,吴倩【关键词】丹酚酸;抗氧化;DNA损伤;化学发光 摘要:目的探讨丹酚酸抗氧化活性及其对DNA氧化损伤的保护作用机制。方法运用自由基反应模型观察丹酚酸对二苯代苦味酰肼自由基(DPPH)和羟自由基的淬灭效应,使用邻菲罗啉(Phen)-CuSO4-VC-H2O2-DNA化学发光体系测定丹酚酸对DNA损伤的抑制作用。高效液相色谱(HPLC)测定丹酚酸的组成。结果丹酚酸水提物(AE)、乙酸乙酯萃取物(EE)、大孔吸附树脂纯化物(RE)和对照维生素(VC)、二丁基羟基甲苯(BHT)对DPPH自由
2、基的半数清除浓度(IC50)分别为1412,153,146,158和715μg/ml。化学发光体系中,丹酚酸的加入能明显抑制并延迟DNA损伤。AE、EE、RE抑制发光50%浓度(IC50)值分别为12936,620,492μg/ml。丹酚酸清除DPPH自由基能力和对羟自由基攻击的DNA损伤保护作用受丹酚酸组成和丹酚酸B含量的影响。结论丹酚酸属于预防型和断链型抗氧化剂,并可有效清除DPPH和羟自由基,对DNA损伤有明显保护作用。丹酚酸的抗氧化活性及对DNA损伤的保护作用与丹酚酸B含量有关。 关键词:丹酚酸;抗氧化;DNA损伤;化学发光 Antioxid
3、antactiviyandprotectioneffectofsalvianolicacidsonDNAdamage Abstract:ObjectiveTostudyontheantioxidantactivityofsalvianolicacidsandmechanismsofitsprotectionagainstDNAantioxidativedamage.MethodsFreeradicalmodelployedtoinvestigatethescavengingactivityto1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl
4、(DPPH)andhydroxylfreeradicals.ThemechanismsoftheeffectsofsalvianolicacidsonprotectionagainstDNAdamageeasuredbychemiluminescenceonthereactionsystemofphenanthroline(Phen)-CuSO4-VC-H2O2-DNA.SalvianolicacidspositioninsamplesinedaccordingtoHPLCanalysis.ResultsThehemi-inhibitableconcen
5、tration(IC50)ofcrudeaqueousextract(AE),ethylacetateextract(EE),resinextract(RE),ascorbate(VC)andbutylatedhydroxytoluene(BHT)toDPPHfreeradicalsl.ThreeextractscouldobviouslyinhibitanddelayDNAdamagecausedbyhydroxylfreeradicals.TheIC50valvueofchemiluminescenceofAE,EEandREl.Thescaveng
6、ingactivityandprotectiveeffectsagainstDNAdamageageage;chemiluminescence 丹参是我国防治心脑血管病的传统药物,对冠心病、高血压、糖尿病肾病及癌症等疗效确切。近20多年来的药效研究表明,丹酚酸是丹参活血化瘀作用的主要功能成分〔1〕。自由基参与机体多种疾病的发生和发展过程,清除自由基、提高机体抗氧化能力,是许多药物防治慢性疾病的重要途径〔2,3〕。从化学结构上分析,丹酚酸类化合物是酚羟基的供体,具有抗氧化活性的结构基础。本文研究了丹酚酸对二苯代苦味酰肼自由基(DPPH)的清除效应,并探讨
7、其对体外DNA氧化损伤的保护作用及可能机制,为进一步研究丹酚酸药理作用提供科学依据。 1材料与方法 11仪器及色谱条件LC-10A高效液相色谱仪(日本岛津公司);DU600紫外-可见分光光度计(美国Backman公司);OrionII高灵敏度板式化学发光检测仪(德国BertholdDetectionSystems公司)。AlltimaC18(150mm×46mm,5μm)色谱柱;流动相为水(05%冰醋酸)(A)-乙腈(B);梯度条件:0~30min时5%~25%β,30~60min时25%~30%B;流速10ml/min;柱温为室温;检测波长280n
8、m;进样量20μl。 12试剂丹酚酸B对照品(中国药品生物制品检定所,批号11
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