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1、熊果昔对体外培养的人黑素细胞的作用丁国斌，陈璧，汤朝武【关键词】熊果背关键词：熊果昔;黑素细胞;一元酚单氧酶;黑素类/牛物合成摘要：H的研究熊果甘对体外培养的正常人表皮黑素细胞的作用效应.方法利用碱性成纤维细胞牛长因子为主要有丝分裂原建立正常人表皮黑索细胞培养系，MTT法测定熊果昔对黑素细胞活力的影响，以左旋多巴为底物测定酪氨酸酶活性，比色法测定黑素含量，并与曲酸及维牛素C磷酸酯的结果比较.结果熊果昔对体外培养的正常人黑素细胞酪氨酸酶活性呈浓度依赖性抑制，可显著减少黑素牛成量，对黑素细胞活力影响很小.结论熊果
2、甘对体外培养的人黑素细胞的酪氨酸酶活性及黑素牛成有显著抑制作用，且细胞毒性很低.EffectsofarbutinonculturedhumanmelanocytesDINGGuo-Bin,CHENBi,TANGChao-WuDepartmentofBurnSurgery,XijingHospital,FourthMilitaryMedicalUniversity,Xi'an710033,ChinaKeywords:arbutin;melanocytes;monophenolmonooxyge-nase;mel
3、anins/biosynthesisAbstract:ATMTostudytheeffectsofarbutinonculturedhumanmelanocytes.METHODSBasicfibroblastgrowthfactor(bFGF)wasemployedtoestablishthecultureofnor-malhumanmelanocytes.Afterarbutinwasaddedintocul-turedhumanmelanocytes,thecellviability,tyrosinas
4、eactivi-tyandmelanincontentweremeasuredbyMTTassay,uti-lizationofL~Dopaasthesubstrate,andcolorimetrieanaly-sis,respectively.Furthermore,theeffectsofarbutinonthemelanocyteswerecomparedwiththatofkojicacidandAscor-bicacid2-phosphate.RESULTSArbutinshowedaconcen-
5、tration-dependentreductionintyrosinaseactivityofhumanmelanocyte.Melanincontentwasreducedsignificantlybyar-butin,whichhas1ittieinfluenceonmelanocytesviability.CONCLUSIONArbutincansignificantlyinhibitthetyrosi-naseactivityandmelanogenesisofculturedhumanmelano
6、cyteswithlowcytotoxicity.0引言皮肤色素沉着常见于黄褐斑、老年斑及II度烧伤创而愈合后，对外观影响较大.黑素细胞合成黑素是在其特征性细胞器一黑素小体内进行的，酪氨酸酶是黑素牛成的主要限速酶，催化酪氨酸梵化为多巴并进而形成多巴酿的反应［1］・酪氨酸酶抑制剂熊果昔是近来研究较多的一种脱色索药物，由于实验使用的细胞系及培养方法不同，各家报道的结果出入很大［1-5］•我们利用体外培养的正常人表皮黑素细胞，研究了熊果昔对黑素细胞的增殖、酪氨酸酶活性及黑素牛成量的影响，并与曲酸及维牛素C磷酸酯比较
7、，为进一步的临床应用提供参考.1材料和方法1.1材料熊果昔(arbutin),曲酸(kojicacid),维生素C磷酸酯(AP,L-ascorbicacid2-phosphate)及左旋多巴(L-Dopa)购自美国Sigma公司;RPMI1640培养基及霍乱毒素(choleratoxin)购自美国Gibco公司;Dispase酶购自日本三光纯药株式会社；(methylthiszdyltetrazolium,MTT),TritonX-100,转铁蛋白及胰蛋白酶(1:250)购自华美公司；碱性成纤维细胞牛长因子(
8、bFGF)购自珠海亿胜牛物制药公司；小牛血清购自杭州四季青公司•倒置显微镜，酶联免疫检测仪等.药物溶液根据Curto等［3］的方法配制:先配制含无水乙醇300mL・L-1,2-内二醇500mL・L-1,双蒸水200mL・L-1的溶液(PEH),再用0.Olmol・L-1的PBS稀释成100mL・T-1的PEH作为溶媒•实验前用lOOmL・L-1的PEII将待测药物配成10g・L-l的浓度，并依次倍比
