甲氨蝶呤对大鼠脊髓损伤的药效作用研究

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1、学号：２０１２１０１２１戀片旁种＾啼矣Ａ净硕±学位论文甲氨蝶吟对大鼠脊髓损伤的药效作用研究口统招硕±□高校教师在职攻读硕去□中职教师在职攻读硕ｉ学院生命科学学院学生姓名张既学科专业化学生物学指导教师颇兵教巧２０１５年５月３０日分类号；：密级ＵＤＣ：编号；江西科技师范大学硕±学位论文甲巧碟跨对大鼠脊髓损伤的药效作用研究Ｅｆｆｉｃａｃｒｅｓｅａｒｃｈｏｆｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅｏｎｓｉｎａｌｃｏｒｄｉｎｕｒｉｎｒａｔｓｙｐｊｙ张思、职称顾兵教授

2、指导教师姓名串请挙化级别硕古学位学科专业名務化学生衡学论义按彭日期２０１５年５月２５日论文答辩日期２０１５年５月３０日学位授予单江西科巧师范大学答辩委员会主席：评巧人：２０１５年５月３０日学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外研究成果。据我所知，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得知曲科我締落乂旁或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在

3、论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写签字日期：ＶＩＳ年＾月ｉ日、学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解注酉型蓝陋莖去拳有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权江西科技师范大学可Ｗ裕学位论文的全部或部分巧容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名（手写）：＾导师签名（手写）：ｙｙ—签字日期：年＾月１日签字日期：年＾

4、月ＪＴ日５１巧要目的：评价传统抗炎药甲氨蝶吟（ｍｅｔｈｏｔｒｅｘａｔｅ，ＭＴＸ）对大鼠继发性脊髓损伤（ｓｉｎａｌｃｏｒｄｉｎｕｒｙＳＣＩ）的治疗，包括对、炎症、水肿、神经细ｐｊ，效果氧化应激胞调亡机制的抑制作用，并与经典治疗ＳＣＩ药物甲强龙（ｍｅｌｈｙｌｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅＭＰ），进行比较，Ｗ及探索ＭＴＸ与ＭＰ联合治疗对ＳＣＩ大鼠运动功能及基因表达谱的影响，探讨联合作用的分子机制。从而希望为明确ＭＴＸ对于ＳＣＩ的作用效果提供有效的实验数据，Ｗ及为临床上寻找到更合适的药物治疗方式提供新思路。方法

5、：１．ＳＤＭｏｄｅｌ组、ＭＴＸ组、ＭＰ组和Ｓｈａｍ组将成年大鼠随机分为，采用连有ＴＭＰｉｎＰｏｉｎｔ高精度接触传感器的立体撞击器建立ＳＣＩ模型。术后３０ｍｉｎ，ＭＴＸ组颈部皮下注射ＭＴＸ（０．５ｍｇ／ｋｇ书Ｗ），ＭＰ组尾静脉注射ＭＰ（３０ｍｇ／ｋｇ巧Ｗ）。Ｍｏｄｅｌ组伤后不做给药处理，假手术组仅进行Ｔ１０椎板切除术。通过ＥＬＩＳＡ方－－－－ＮＴ法检测伤后３ｈ、６ｈ、１２ｈ和４８ｈ的ＭＤＡ、８ｉｓｏＰＧＦ２ａ、４ＨＮＥ、３、ＡＯＰＰ、Ｐｒｏａｒｂｏｎ－ｔｅｉｎｃｌ和８ＯＨｄＧ含量，通过巧光定量

6、ＰＣＲ方法检测伤后３ｈ、６ｈ、ｙ口－－、－－ｈ和４８ｈ的ＡＱＰ４、ＴＮＦｃｕ正巧、ＢａｘＢｃｌｘ和Ｂｃｌ２的表达量，并通过免疫组织化学染色法观察损伤中也及邻近区域的神经元存活状况。２－．将成年ＳＤ大鼠术前在ＺＨＰＴ计算机控制动物５天实验跑台进行适应性训练。然后随机分为Ｍｏｄｅｌ组、ＭＴＸ组、ＭＰ组、ＭＴＸ＋ＭＰ组和Ｓｈａｍ组。术后３０ｍｉｎ，ＭＴＸ组颈部皮下注射ＭＴＸ（０．５ｍｇ／ｋｇ书Ｗ），ＭＰ组尾静脉注射ＭＰ（３０ｍｇ／ｋｇ书Ｗ），ＭＴＸ＋ＭＰ组先于伤后３０ｍｉｎ尾静脉注射ＭＰ（３０ｍｇ／ｋｇ），

7、再于伤后Ｉｄ起颈部皮下注射ＭＴＸ（０．３ｍ／ｋ）并隔日给药，连续２Ｗ。Ｍｏｄｅｌ组伤ｇｇ，后不做给药处理，Ｓｈａｍ组仅作Ｔ１０椎板切除术。应用ＴｒｅａｄＳｃａｎ步态分析系统描述术前及伤后２、４、８ｗ大鼠的行为学特征。术后８ｗ，处死大贏，并对脊髓组织进行基因表达谱分析。结果：１．ＥＬＩＳＡ结果显示ＭＴＸ治疗后屯个氧化指标含量均较Ｍｏｄｅｌ组降低，仅在个别时间点与ＭＰ组相比抑制效果稍差。ＰＣＲ定量结果显示，ＭＴＸ治疗后ＡＱＰ４、－－Ｕ正－ｘ和Ｂｃ－ＴＮＦ０Ｉｐ和Ｂａｘ的ｍＲＮＡ表达量较Ｍｏｄｅｌ组降低，Ｂｃｌｌ

8、２的表达Ｉ量较Ｍｏｄｅｌ组升高，仅在个别时间点恢复效果不如ＭＰ组。ＭＩＸ组伤后３ｄ时ＮｅｕＮ免疫組化染色观察到离损